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蛋白質(zhì)濃縮問題——超濾濃縮管的使用及保存

時間:2013-8-30閱讀:559
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2.1  濃縮樣品
1、要濃縮的樣品含鹽量必須0.3M以上,含鹽量低的樣品須補加到0.3MNaCl。
2、在內(nèi)管(附有3KD膜)中加入500µl樣品,將內(nèi)管套入外管。
3、對稱放置離心管,14520rpm(即14000g)離心。(離心5min約濃縮2倍,10min約4倍,15min約6倍,20min約8倍,30min約10倍)。
4、離心結(jié)束后,將內(nèi)管倒置套在另一個干凈的離心管呢,3880rpm離心min收集濃縮后的樣品?;蛘哂靡埔浩髦苯游鰞?nèi)管中的樣品。
2.2  濃縮管使用后的處理和保存
1、使用完的濃縮管,立即加入500µl含1MNaCl的緩沖液(此緩沖液與濃縮樣品的緩沖液一致),8000rpm離心20min。
2、甩凈內(nèi)管中的鹽溶液,將內(nèi)管放入超純水中浸泡1h。
3、內(nèi)管加入超純水500µl,8000rpm離心5min。
4、甩凈內(nèi)管中的水,加入500µl0.2MNaOH,8000rpm離心20min。
5、甩凈內(nèi)管中的NaOH溶液,用超純水再8000rpm離心5min。
6、甩凈內(nèi)管中的水,放入含0.2-0.5‰NaN3的生理鹽水中。
7、外管用自來水洗凈后,用超純水沖洗干凈,晾干。
 

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