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培養(yǎng)基
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士鋒生物細(xì)胞和細(xì)胞內(nèi)含物的觀察

時間:2014/8/6閱讀:854
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細(xì)胞質(zhì)內(nèi)含有多種細(xì)胞器。有些細(xì)胞器如線粒體、高爾基體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、溶酶體等普遍存在于各種細(xì)胞中,而另有些細(xì)胞器如葉綠體,只存在于植物細(xì)胞中。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的這些結(jié)構(gòu),除葉綠體外,一般在光學(xué)顯微鏡下不易看見,必須經(jīng)過一定的固定染色方法處理后,才能看到大多數(shù)細(xì)胞器,或直接用相差顯微鏡觀察。 

線粒體 
線粒體是一種動態(tài)的易變結(jié)構(gòu)。經(jīng)過處理在光學(xué)顯微鏡下呈現(xiàn)為顆粒狀、棒狀或彎曲細(xì)線。線粒體的形態(tài)和數(shù)量隨不同生物、不同組織及不同生理狀態(tài)而發(fā)生變化,例如肝細(xì)胞、胰細(xì)胞的線粒體通常呈線狀,成熟的卵細(xì)胞內(nèi)線粒體呈顆粒狀,腎細(xì)胞內(nèi)的線粒體呈棒狀。顯示線粒體的方法可以概括為以下幾種: 
1.生活細(xì)胞的觀察。如將組織培養(yǎng)細(xì)胞或其他生活細(xì)胞,放在相差顯微鏡下,就可以看到細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有線狀小體活動,這就是線粒體。 
細(xì)胞和細(xì)胞內(nèi)含物的觀察2.活細(xì)胞染色法。就是利用某些無毒或毒性較小的染料,顯示出細(xì)胞內(nèi)某些特殊結(jié)構(gòu)存在的真實性,而并不對細(xì)胞的活動有影響,如Janus green B(詹納斯綠B),就是一種毒性較小的堿性染料。將其配制成一定濃度,對活細(xì)胞進(jìn)行染色,在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可以看到被染成藍(lán)綠色的線狀或顆粒小體,這就是線粒體。還可看到其在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的活動狀況。線粒體所以能顯示出藍(lán)綠色,是由于線粒體中具有細(xì)胞色素氧化酶系統(tǒng),它是染料始終處于氧化狀態(tài)呈藍(lán)綠色,而在周圍的細(xì)胞質(zhì)中的染料被還原呈無色。 
3. 固定染色法(即*制片法)。用特殊的固定液染色處理動物的組織或細(xì)胞后,可顯示出線粒體的形態(tài)。但所用材料必須新鮮,否則線粒體常因已經(jīng)破壞而顯示不出,線粒體的組成成分主要是脂蛋白,脂類又以磷脂為主,用于線粒體的固定液含有餓酸,重鉻酸鉀等。因為兩者均能使脂類物質(zhì)保存下來,故可顯示出線粒體的形態(tài)。用于顯示線粒體形態(tài)的固定、染色方法較多,常用的有Altmann染色法、Regand染色法及Chmpy-Kull染色法等,但欲顯示線粒體的細(xì)微結(jié)構(gòu),則要用電鏡技術(shù)。 
4.生化分離提取方法。在一定的低溫條件下,將組織細(xì)胞破碎制備成勻漿,用于線粒體組分及其在不同生理狀態(tài)的分離分析研究。 

高爾基體 
高爾基體顯示的方法,目前使用較多的是: 
1.固定染色法。1889年Golgi用鍍銀的方法顯示出這種細(xì)胞器,目前仍應(yīng)用AgNO3或餓酸處理材料,將高爾基體顯示為棕黑色。這是由于AgNO3、餓酸在高爾基體的部位被還原之故,所以顯出高爾基體的形態(tài)及其在細(xì)胞內(nèi)的分布。常用的方法有DaFano硝酸鈷-鍍銀法,Aoyama鍍銀法及Romony Cajal鍍銀法等,而欲顯示其細(xì)胞結(jié)構(gòu),就得使用電鏡技術(shù)。 
2.活體染色法。將中性紅配制成一定的濃度,對細(xì)胞進(jìn)行活體染色,以顯示高爾基體。但此種顯示高爾基體的方法,仍不如詹納斯綠顯示線粒體的方法更為廣泛。因為中性紅只能染高爾基體的液泡部分,因此有一定的局限性。

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