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培養(yǎng)基
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抗體
生物試劑
細胞
菌株
血清
細胞分離試劑
試劑盒

犬細小病毒(CPV)ELISA試劑盒使用說明書

時間:2014-4-23閱讀:576
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犬細小病毒(CPV)抗體酶聯(lián)免疫ELISA

試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

藥品名稱:

通用名:犬細小病毒(cPV)抗體酶聯(lián)免疫分析試劑盒

使用目的:

本試劑盒定性測定血液、或其它相關組織中細小病毒(CPV)抗體

實驗原理:

本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法(ELISA)測定標本中細小病毒(CPV) 抗體。用純化的犬細小病毒(CPV)抗原包被微孔板,制成固相抗原,可與樣品中細小病毒(CPV) 抗體相結合,經(jīng)洗滌除去未結合的抗體和其他成分后再與HRP標記的細小病毒(CPV)抗原結合,形成抗原-抗體-酶標抗原復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中細小病毒(CPV)抗體的存在與否。

試劑盒組成:

 

1

20倍濃縮洗滌液

20ml×1

7

終止液

3ml×1

2

酶標試劑

3ml×1/

8

陽性對照

0.5ml×1

3

酶標包被板

12孔×4

9

陰性對照

0.5ml×1

4

樣品稀釋液

3ml×1

10

說明書

1

5

顯色劑A

3ml×1

11

封板膜

2 

6

顯色劑B

3ml×1

12

密封袋

1

 

標本要求:

1.標本處理:血清、血漿標本可直接檢測

2.標本按要求制備后盡早進行實驗。如不能及時檢測,可將標本在-20保存一個月,但應避免反復凍融。

3.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟:

1.         編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)

2.         加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,

3.         溫育:用封板膜封板后置37溫育30分鐘。  

4.         配液:將20倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用

5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

6.         加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7.         溫育:操作同3。

8.         洗滌:操作同5。

9.         顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37避光顯色15分鐘

10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11.     測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

 

結果判定:

  試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10

  臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

  陰性判定:樣品OD臨界值(CUT OFF)者為犬細小病毒(PPV)抗體陰性

  陽性判定:樣品OD≥ 臨界值(CUT OFF)者為犬細小病毒(PPV)抗體陽性

注意事項

1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。

2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

3.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

4.  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

5.底物請避光保存。

6.試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm

7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時必須注意安全。

規(guī)格:

     48人份/

保存條件及有效期

1.試劑盒保存:;2-8。

2.有效期:6個月

 

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