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標(biāo)準(zhǔn)品
培養(yǎng)基
培養(yǎng)基原料 霍亂弧菌診斷血清 大腸艾希氏菌診斷血清 志賀氏菌屬診斷血清 沙門氏菌屬診斷血清 標(biāo)準(zhǔn)血清,診斷血清 抗生素藥敏紙片 微生物配套試劑 微生物生化管 管裝培養(yǎng)基 即用型液體培養(yǎng)基 一次性培養(yǎng)基平板 顯色培養(yǎng)基 臨床培養(yǎng)基 菌種保存培養(yǎng)基 四環(huán)素檢定、厭氧亞硫酸鹽還原桿菌檢測培養(yǎng)基 維生素檢測培養(yǎng)基 一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生檢測培養(yǎng)基 罐頭食品商業(yè)無菌檢測培養(yǎng)基 飲用水及水源檢測培養(yǎng)基 藥品、生物制品檢測培養(yǎng)基 化妝品檢測培養(yǎng)基 動物細(xì)胞培養(yǎng)基 啤酒檢驗培養(yǎng)基 軍團(tuán)菌檢測培養(yǎng)基 支原體檢測培養(yǎng)基 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗培養(yǎng)基 彎曲桿菌檢驗培養(yǎng)基 產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、厭氧菌檢驗培養(yǎng)基 阪崎腸桿菌檢驗培養(yǎng)基 溶血性鏈球菌檢測培養(yǎng)基 李斯特氏菌檢測培養(yǎng)基 弧菌檢測培養(yǎng)基 乳酸菌、雙歧桿菌檢測培養(yǎng)基 酵母、霉菌檢測培養(yǎng)基 檢測培養(yǎng)基 沙門氏菌、志賀氏菌檢驗培養(yǎng)基 大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌及腸桿菌科檢測培養(yǎng)基 細(xì)菌總數(shù)檢測,增菌培養(yǎng)基
抗體
生物試劑
細(xì)胞
菌株
血清
細(xì)胞分離試劑
試劑盒

堿性磷酸酶鈣―鈷法

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   磷酸 酶(phosphatase)是水解磷酸酯酶的總稱。磷酸酶不僅參與磷酸酯化合物的水解反應(yīng)。而且也參與其逆反應(yīng)及磷酸轉(zhuǎn)移反應(yīng)。

    1.堿性磷酸酶  堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)在堿性環(huán)境下可催化各種酚和醇的磷酸酯水解,還具有磷酸轉(zhuǎn)移作用,在細(xì)胞膜上運(yùn)輸作用較為活躍,如腎近端小管的刷狀緣、小腸上皮的微絨毛、肝臟的膽小管、毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞及神經(jīng)元的突觸膜均可顯示此酶活性。

    在堿性環(huán)境(;pH 9.2~9.4)中,堿性磷酸酶將磷酸鹽的底物(如β-,α-萘酚磷酸鈉)分解,產(chǎn)生的磷酸離子被孵育液中的鈣離子捕獲生成磷酸鈣沉淀。因磷酸鈣不能顯色,需加入硝酸鈷,用鈷離子置換鈣離子,形成磷酸鈷沉淀后用硫化銨處理,形成棕黑色硫化鈷顆粒沉淀,從而顯示酶活性部位,硫化鉆沉淀的多少與堿性磷酸酶含量成正比,其反應(yīng)通式

堿性磷酸酶鈣-鈷法反應(yīng)原理

1)孵育液配制

    2%氯化鈣          20ml

    2%鈉        10ml

    3%β    10ml

    5%          5ml

    蒸餾水             5ml

    孵育液zui終pH 9.4,置于冰箱內(nèi)保存。

    2)染色程序:①新鮮組織恒冷箱切片(可用10%福爾馬林固定10分鐘,或不固定);②人孵育液,37C~孵育10分鐘(腎)至 60分鐘(肝);③流水沖洗;分鐘;④人2%硝酸鈷溶液2分鐘;⑤蒸餾水浸洗;⑥人1%硫化銨溶液內(nèi)1分鐘;⑦蒸餾水洗;⑧甘油明膠封固。

    3)結(jié)果與評價:酶 活性部位顯示棕黑色為硫化鈷沉淀。該法的反應(yīng)產(chǎn)物可發(fā)生擴(kuò)散,定位欠準(zhǔn)確,應(yīng)加以注意。

    4)對照實驗:加入抑制劑L四咪唑等結(jié)果為陰性;去底物(孵育液中用10ml蒸餾水代替底物)結(jié)果為陰性。

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