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標(biāo)準(zhǔn)品
培養(yǎng)基
培養(yǎng)基原料 霍亂弧菌診斷血清 大腸艾希氏菌診斷血清 志賀氏菌屬診斷血清 沙門氏菌屬診斷血清 標(biāo)準(zhǔn)血清,診斷血清 抗生素藥敏紙片 微生物配套試劑 微生物生化管 管裝培養(yǎng)基 即用型液體培養(yǎng)基 一次性培養(yǎng)基平板 顯色培養(yǎng)基 臨床培養(yǎng)基 菌種保存培養(yǎng)基 四環(huán)素檢定、厭氧亞硫酸鹽還原桿菌檢測培養(yǎng)基 維生素檢測培養(yǎng)基 一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生檢測培養(yǎng)基 罐頭食品商業(yè)無菌檢測培養(yǎng)基 飲用水及水源檢測培養(yǎng)基 藥品、生物制品檢測培養(yǎng)基 化妝品檢測培養(yǎng)基 動物細(xì)胞培養(yǎng)基 啤酒檢驗(yàn)培養(yǎng)基 軍團(tuán)菌檢測培養(yǎng)基 支原體檢測培養(yǎng)基 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 彎曲桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、厭氧菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 阪崎腸桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 溶血性鏈球菌檢測培養(yǎng)基 李斯特氏菌檢測培養(yǎng)基 弧菌檢測培養(yǎng)基 乳酸菌、雙歧桿菌檢測培養(yǎng)基 酵母、霉菌檢測培養(yǎng)基 檢測培養(yǎng)基 沙門氏菌、志賀氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌及腸桿菌科檢測培養(yǎng)基 細(xì)菌總數(shù)檢測,增菌培養(yǎng)基
抗體
生物試劑
細(xì)胞
菌株
血清
細(xì)胞分離試劑
試劑盒

大腸桿菌質(zhì)粒DNA的提取

時(shí)間:2015-9-9閱讀:719
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一、大腸桿菌質(zhì)粒dna的提取  
質(zhì)粒dna的提取是從事基因工程工作中的一項(xiàng)基本實(shí)驗(yàn)技術(shù),但提取方法有很多種,以下介紹一種zui常用的方法:  
堿裂解法:此方法適用于小量質(zhì)粒dna的提取,提取的質(zhì)粒DNA可直接用于酶切、PCR擴(kuò)增、銀染序列分析。方法如下:  
1、接1%含質(zhì)粒的大腸桿菌細(xì)胞于2mllb培養(yǎng)基。  
2、37℃振蕩培養(yǎng)過夜。  
3、取1.5ml菌體于Ep管,以4000rpm離心3min,棄上清液。  
4、加0.lml溶液I(1%葡萄糖,50mM/LEDTApH8.0,25mM/LTris-HClpH8.0)充分混合。  
5、加入0.2ml溶液II(0.2mM/LNaOH,1%SDS),輕輕翻轉(zhuǎn)混勻,置于冰浴5min。  
6、加入0.15m1預(yù)冷溶液III(5mol/LKAc,pH4.8),輕輕翻轉(zhuǎn)混勻,置于冰浴5min。  
7、以10,000rpm離心20min,取上清液于另一新Ep管  
8、加入等體積的異戊醇,混勻后于?0℃靜置10min。  
9、再以10,000rpm離心20min,棄上清。  
10、用70%乙醇0.5ml洗滌一次,抽干所有液體。  
11、待沉淀干燥后,溶于0.05mlTE緩沖液中  
煮沸法  
1、將1.5ml培養(yǎng)液倒入eppendorf管中,4℃下12000g離心30秒。  
2、棄上清,將管倒置于衛(wèi)生紙上幾分鐘,使液體流盡。  
3、將菌體沉淀懸浮于120mlSTET溶液中,渦旋混勻。  
4、加入10ml新配制的溶液(10mg/ml),渦旋振蕩3秒鐘。  
5、將eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。  
6、用微量離心機(jī)4℃下12000g離心10分鐘。  
7、用無菌牙簽從eppendorf管中去除細(xì)菌碎片。  
8、取20ml進(jìn)行電泳檢查。

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