會(huì)員1.png)
您所在位置：產(chǎn)品搜索
請(qǐng)輸入產(chǎn)品關(guān)鍵字：
暫無(wú)信息 |
聯(lián)系方式
地址：浙江省杭州市西湖區(qū)文二路319號(hào)西湖國(guó)際科技大廈5號(hào)樓中區(qū)3樓
郵編：310012
聯(lián)系人：采購(gòu)部
留言：在線(xiàn)留言
商鋪：http://www.niunang.cn/st84879/
郵編：310012
聯(lián)系人：采購(gòu)部
留言：在線(xiàn)留言
商鋪：http://www.niunang.cn/st84879/
技術(shù)文章
腫瘤細(xì)胞的軟瓊脂集落培養(yǎng)和測(cè)定
點(diǎn)擊次數(shù)：325 發(fā)布時(shí)間：2012-8-8
腫瘤細(xì)胞的軟瓊脂集落培養(yǎng)和測(cè)定
一、原理
在體外培養(yǎng)基中由一個(gè)祖先細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞團(tuán)，稱(chēng)之為集落。腫瘤細(xì)胞能無(wú)限繁殖，所以具有這種能力，而成熟分化的細(xì)胞則不能形成集落。HL一60細(xì)胞是一種急性早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞，在體外無(wú)需加刺激因子，可在軟瓊脂培養(yǎng)基中形成集落。二甲基亞砜是一種細(xì)胞分化誘導(dǎo)劑，經(jīng)二甲基亞砜處理后的HL一60細(xì)胞按粒系途徑定向成熟分化，同時(shí)細(xì)胞的增殖力降低，幾乎全部細(xì)胞喪失了軟瓊脂中形成集落的能力。因此，這種方法可用于細(xì)胞分化的基礎(chǔ)研究和臨床*的療效檢驗(yàn)等方面。
二、操作
1．收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HL一60細(xì)胞，先按實(shí)驗(yàn)十三測(cè)定細(xì)胞活力，然后調(diào)整細(xì)胞濃度，制成300～1000活細(xì)胞/ml的細(xì)胞懸液。
2．取二個(gè)培養(yǎng)瓶每個(gè)瓶中加9ml調(diào)整好濃度的細(xì)胞懸液，然后各加入1ml 3％瓊脂（已融化，在65℃水浴中放置），迅速加入，混勻。
3．用微量加樣器吸140μl二甲基亞砜（MDSO），加到一個(gè)瓶中，充分混勻，為實(shí)驗(yàn)組，另一瓶不加DMSO，為空白對(duì)照組。
4．取一個(gè)16mm多孔培養(yǎng)板，每孔加1ml（35mm培養(yǎng)皿需加2ml）細(xì)胞瓊脂懸液，勿有氣泡，將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組分兩組加好，蓋上蓋并作好標(biāo)記。
5．在室溫放置20分鐘使細(xì)胞瓊脂懸液凝固。
以上各步驟均在無(wú)菌條件下進(jìn)行。
6．然后移培養(yǎng)板或平皿于CO2培養(yǎng)箱中37℃進(jìn)行培養(yǎng)。
7．培養(yǎng)7～10天，肉眼觀(guān)察并計(jì)數(shù)細(xì)胞集落。
三、結(jié)果
以肉眼可見(jiàn)的細(xì)胞團(tuán)（含500個(gè)以上細(xì)胞）作為計(jì)數(shù)集落的標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)照組HL一60細(xì)胞在含0.3％的軟瓊脂培養(yǎng)基中生長(zhǎng)良好，每個(gè)孔中可見(jiàn)有多個(gè)集落形成，而實(shí)驗(yàn)組HL一60細(xì)胞因經(jīng)二甲基亞砜誘導(dǎo)分化，細(xì)胞在軟瓊脂中的集落形成明顯減少。
四、集落的計(jì)數(shù)和計(jì)算
集落數(shù)=n孔中細(xì)胞集落數(shù)總和/n孔
集落形成率=集落數(shù)/接種培養(yǎng)細(xì)胞總數(shù)×100％