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細(xì)胞膜的通透性觀察實(shí)驗(yàn)原理和操作步驟

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?br />1.了解細(xì)胞膜對(duì)物質(zhì)通透性的一般規(guī)律。
2.了解溶血現(xiàn)象及其發(fā)生機(jī)制。
 
二、實(shí)驗(yàn)原理
細(xì)胞膜是細(xì)胞與環(huán)境進(jìn)行物質(zhì)交換的選擇通透性屏障。它是一種半透膜，可選擇性控制物質(zhì)進(jìn)出細(xì)胞。各種物質(zhì)出入細(xì)胞的方式是不同的，水是生物界zui普遍的溶劑，水分子可以按照物質(zhì)濃度梯度從滲透壓低的一側(cè)通過(guò)細(xì)胞膜向滲透壓高的一側(cè)擴(kuò)散，這種現(xiàn)象就是滲透。滲透作用是細(xì)胞膜的主要功能之一。將紅細(xì)胞放在低滲鹽溶液中，水分子大量滲到細(xì)胞內(nèi)，可使細(xì)胞脹破，血紅蛋白釋放到介質(zhì)中，由不透明的紅細(xì)胞懸液變?yōu)榧t色透明的血紅蛋白溶液，這種現(xiàn)象稱為溶血。將紅細(xì)胞放在某些等滲鹽溶液中，由于紅細(xì)胞膜對(duì)各種溶質(zhì)的通透性不同，膜兩側(cè)的滲透壓平衡會(huì)發(fā)生改變，也會(huì)發(fā)生溶血現(xiàn)象。因此，發(fā)生溶血現(xiàn)象所需時(shí)間長(zhǎng)短可作為測(cè)量物質(zhì)進(jìn)入紅細(xì)胞速度的一種指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)選用紅細(xì)胞作為細(xì)胞膜透性的實(shí)驗(yàn)材料，將其放入不同的介質(zhì)溶液中，觀察紅細(xì)胞的變化。
 
三、實(shí)驗(yàn)用品
（一） 材料 雞血細(xì)胞
（二）器材 普通顯微鏡、普通離心機(jī)、扭力天平、10ml 試管、10ml 刻度離心管、試管架，2ml 注射器（無(wú)需針頭）或5ml 移液管、洗耳球、滴管、載玻片、擦鏡紙、記號(hào)筆等。
（三）試劑
1．Alsever 溶液
葡萄糖 2.05g
檸檬酸鈉 （Na9C6H5O7.2H2O） 0.89g
檸檬酸（C6H 6O7.H2O） 0.05g
氯化鈉 0.42g
蒸餾水 100ml
調(diào)PH 至7.2，過(guò)濾滅菌或高壓滅菌10min，置4℃冰箱保存。
2. 0.128 mol/L NaCl 溶液。
3． 0.05 mol/L NaCl 溶液。
4． 0.4 mol/L NaCl 溶液。
3. 0.128 mol/L NH4Cl 溶液。
4. 0.128 mol/L NH4AC 溶液。
5. 0.128 mol/L NaNO3溶液。
7. 0.32 mol/L 葡萄糖。
8. 0.32 mol/L 甘油。
9. 0.32 mol/L 乙醇。
10. 0.32 mol/L 丙酮。
11. 蒸餾水。
 
四、實(shí)驗(yàn)操作
1．從集市買一只活雞現(xiàn)殺取血5ml（防止污染），放入盛有20ml Alsever’s 液瓶中，混勻后置冰箱保存?zhèn)溆茫? 周內(nèi)使用）。
2. 使用前，取用Alsever’s 液保存的新鮮雞血5ml ， 加入8ml 的0.128 mol/L 的 NaCl 溶液，小心混勻，1000 r/min 離心5min，如此3 次洗滌，zui后配成30%的雞紅細(xì)胞（CRBC）懸液。
3. 取 11 支試管，按附表中所示測(cè)試溶液，分別取樣各3ml，作出標(biāo)記后，各管均加入紅細(xì)胞懸液2 滴，混勻后靜置于溫室中，觀察各支試管中發(fā)生溶血的時(shí)間及其變化。
 
五、觀察結(jié)果
1. 試管內(nèi)液體分兩層：上層淺黃色透明，下層紅色不透明為不溶血（－），鏡檢紅細(xì)胞完好呈雙凹盤狀。
2. 如果試管內(nèi)液體混濁，上層帶紅色者，稱不*溶血（＋或＋＋），鏡檢有部分紅細(xì)胞呈碎片。
3. 如果試管內(nèi)液體變紅而透明者，稱*溶血（＋＋＋），鏡檢發(fā)現(xiàn)細(xì)胞全部呈碎片。
六、實(shí)驗(yàn)建議
1. 雞血在離心時(shí)，試管均需在扭力天平上平衡。
2. 目測(cè)紅細(xì)胞體積或置于帶刻度的離心管中，加入生理鹽水配成30%的紅細(xì)胞懸液；
3. 試管中有紅細(xì)胞和測(cè)試溶液時(shí)，不應(yīng)強(qiáng)力搖晃，以免造成人為的紅細(xì)胞破裂。