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細(xì)胞因子和重組蛋白溶解必讀（一）

我們知道，PeproTech的所有細(xì)胞因子和蛋白均為凍干粉，這使得運(yùn)輸非常便捷，只要常溫即可。而且，細(xì)胞因子和蛋白凍干粉非常穩(wěn)定，在-20℃或-80℃條件下可保存數(shù)年。凍干粉在使用前需進(jìn)行溶解，然后以液體形式加到培養(yǎng)體系或注射入動(dòng)物體內(nèi)。溶解步驟非常關(guān)鍵，因溶解不好會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞因子或蛋白的失活，這也是很多用戶在實(shí)際使用中經(jīng)常遇到的問(wèn)題。
 
那么，應(yīng)該如何進(jìn)行正確的溶解呢？
 
下面我們以Recombinant Human IL-4 （重組人IL-4，產(chǎn)品編號(hào)：200-04）的說(shuō)明書為例，對(duì)細(xì)胞因子或蛋白的溶解方法進(jìn)行詳細(xì)的闡述。
 
拿到重組人IL-4的說(shuō)明書后，您會(huì)發(fā)現(xiàn)有一段關(guān)于Reconstitution（重懸）的敘述，這段內(nèi)容含有溶解相關(guān)的所有信息。
 
1. Centrifuge the vial prior to opening.
第1步：開蓋前離心試劑管
 
PeproTech的細(xì)胞因子或蛋白凍干粉裝盛在塑料管中，為無(wú)菌包裝。凍干粉在運(yùn)輸過(guò)程中可能會(huì)因顛簸而漂散并粘貼于管壁或管蓋上，所以在打開塑料瓶蓋前，需將凍干粉通過(guò)離心收集到管底，以便用很小體積的液體即可將凍干粉*溶解。
 
有很多用戶會(huì)問(wèn)一個(gè)問(wèn)題，即應(yīng)該用多少轉(zhuǎn)速、多長(zhǎng)時(shí)間離心試劑管，才能達(dá)到良好的收集效果？
答：有些小型高速離心機(jī)（多為進(jìn)口品牌）的面板上有一個(gè)Spin鍵，按了此鍵后，離心機(jī)會(huì)自動(dòng)快速上升到其zui大速度（10000rpm或12000rpm），上升到zui高點(diǎn)后速度即刻下降，直至停止旋轉(zhuǎn)，整個(gè)過(guò)程大約30s。這個(gè)Spin鍵足以很好的將細(xì)胞因子或蛋白收集到管底。
 
但有些實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有這樣的高速離心機(jī)，只有zui高轉(zhuǎn)速為4000-4500rpm的離心機(jī)。這種情況下，需3000-3500rpm離心5min，也能達(dá)到類似的效果。
 
2. Reconstitute in water to a concentration of 0.1-1.0 mg/ml. Do not vortex.
第2步：用無(wú)菌水重懸至0.1-1.0 mg/ml，不可振蕩。
 
這個(gè)步驟即為溶解步驟，非常重要。
 
1） 一定要用推薦的溶液重懸（或溶解）凍干粉
 
用于溶解細(xì)胞因子或蛋白的溶液千差萬(wàn)別。此例中的重組人IL-4需用水溶解，而重組人IL-2 （產(chǎn)品編號(hào)：200-02）則需用100mM Acetic Acid （醋酸）溶解，重組人TGF-beta1 （產(chǎn)品編號(hào)：100-21）需用10mMCitric Acid （檸檬酸），pH3.0溶解，重組人FGF-basic（產(chǎn)品編號(hào)：100-18B）需用5mMTris，pH7.6溶解，重組人FGF-10（產(chǎn)品編號(hào)：100-26）需用5mMSodium Phosphate（磷酸鈉），pH7.4溶解，重組IL-13（產(chǎn)品編號(hào)：200-13）需用20mMMHCl溶解。（注：即使同一重組細(xì)胞因子或蛋白，不同批次的溶解方法也可能有所不同，因此上面的敘述僅供參考。具體應(yīng)該如何溶解應(yīng)以相應(yīng)批次的*說(shuō)明書為準(zhǔn)）。后續(xù)的文章中將對(duì)各種溶解液的配制方法進(jìn)行詳細(xì)的闡述，望繼續(xù)關(guān)注。
 
經(jīng)常有用戶會(huì)問(wèn)，為什么會(huì)有這么多種溶解方法？
答：我們知道，蛋白的溶解性與很多因素有關(guān)，其中比較重要的是pH值和離子強(qiáng)度。PeproTech的細(xì)胞因子或重組蛋白在出廠前均經(jīng)嚴(yán)格測(cè)試，說(shuō)明上所標(biāo)明的溶解液是能夠?qū)⒃摷?xì)胞因子或重組蛋白*溶解的液體。如果您所用的溶解液的pH值和離子強(qiáng)度與說(shuō)明書中所標(biāo)明的不符，很多時(shí)候會(huì)造成細(xì)胞因子或重組蛋白不能*溶解或者根本無(wú)法溶解，這樣所配得的細(xì)胞因子或重組蛋白必然活性不夠或喪失。
 
有不少用戶沒(méi)注意說(shuō)明書上的描述，而是根據(jù)習(xí)慣，直接用PBS或培養(yǎng)液（1640或DMEM等）等溶解細(xì)胞因子或蛋白的凍干粉。這樣做可以嗎？
答：有時(shí)可以，要看具體情況。PeproTech的大多數(shù)細(xì)胞因子或蛋白凍干粉的溶解液不是PBS，此時(shí)千萬(wàn)不能用PBS或培養(yǎng)液直接來(lái)溶解，具體原因在上面已經(jīng)敘述過(guò)。而有部分細(xì)胞因子，如重組人KGF（產(chǎn)品編號(hào)：100-19）和重組人FGF-23（產(chǎn)品編號(hào)：100-52）等，說(shuō)明書上的溶解液即為1x PBS，此時(shí)用PBS溶解*沒(méi)問(wèn)題，那么用培養(yǎng)液溶解也是可以的，不過(guò)還是用先用PBS溶解，然后再用培養(yǎng)液稀釋。