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上海隆壘生物科技有限公司

正常小梁細(xì)胞原代培養(yǎng)

時(shí)間：2013-8-22閱讀：350
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正常小梁細(xì)胞原代培養(yǎng)
 
實(shí)驗(yàn)材料：
1.    材料來(lái)源：人眼、兔眼或者豬眼等；
2.    清洗液：不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加100IU/ml*、100μg/ml*，pH7.2；
3.    器械：*與無(wú)齒鑷等；
4.    消毒液：200IU/ml的*生理鹽水；
5.    培養(yǎng)液：基礎(chǔ)液由DMEM培養(yǎng)基加入HEPES 6.0g/L、NaHCO32.2 g/L以及L-*0.06 g/L配制而成。應(yīng)用液是在基礎(chǔ)液內(nèi)補(bǔ)加15%的胎牛血清、*100IU/ml、*100μg/ml，并用5% NaHCO3調(diào)節(jié)pH至7.0—7.2；
6.    培養(yǎng)器皿：培養(yǎng)瓶、24孔培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿若干；
 
實(shí)驗(yàn)方法：
1.    將離體的供體眼球用200IU/ml的*溶液浸泡消毒5min；
2.    無(wú)菌條件下，沿角膜緣后5mm處環(huán)形剪開(kāi)眼球，剪斷晶狀體懸韌帶，去除晶狀體和玻璃體；
3.    將眼前段倒放在培養(yǎng)皿中，在顯微鏡下用無(wú)齒鑷把虹膜抹離角膜內(nèi)皮面，暴露房角結(jié)構(gòu)。用*緊貼虹膜與鞏膜的附著部位，剪除色素膜；
4.    以PBS溶液或*輕微沖洗小梁組織表面。用*伸入Schlemm管，楔形剪取小梁組織。前界至Schwalbe線，后界至鞏膜嵴。環(huán)形取出一塊小梁組織，置于培養(yǎng)皿中；
5.    經(jīng)PBS漂洗后將小梁*碎，幾乎成漿狀；
6.    用無(wú)齒鑷挑起少許小梁組織，接種于24孔培養(yǎng)板后培養(yǎng)瓶皿中，輕輕鋪平。待組織稍干后加入適量培養(yǎng)液，在CO2培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。第四天后開(kāi)始換液，每周2次；
 

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