福林酚試劑法測定蛋白質(zhì)含量

一、原理：

    蛋白質(zhì)與福林酚試劑反應(yīng)，生成深藍(lán)色復(fù)合物。藍(lán)色的深淺與蛋白質(zhì)含量成正比?？捎梅止夤舛扔嬘?00nm波長下進(jìn)行測定。與標(biāo)準(zhǔn)曲線對照，而確定蛋白質(zhì)含量。

二、試劑與材料：

    標(biāo)準(zhǔn)酪蛋白溶液（250ug/ml）：酪蛋白預(yù)先用微量凱氏定氮法測定純度，再稱量制備。也可用250ug/ml牛血清蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液。

   福林酚試劑：吸取試劑A（0.2M氫氧化鈉與4%*溶液等體積混合）100ml，加入試劑B（2%酒石酸鉀鈉溶液與1%五水硫酸銅等體積混合）2ml混合而成。

   福林酚試劑乙：吸取5ml*試劑加入5ml蒸餾水稀釋而成。

   分光光度計、恒溫水浴槽、蛋白質(zhì)樣品

三、操作方法:

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：

    分別吸取0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml標(biāo)準(zhǔn)溶液于小試管中，分別加進(jìn)不同量的蒸餾水，補足到1ml。各加入5ml試劑甲，混勻后于室溫下（25℃左右）放置10min。再加入0.5ml試劑乙，立即混勻，于室溫下反應(yīng)30min。于500nm波長下測定光密度。以吸光值作為縱坐標(biāo)，蛋白質(zhì)含量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2、樣品蛋白質(zhì)含量的測定

    取1ml樣品溶液，加入5ml試劑甲，混勻，于25℃左右放置10min。再加入0.5ml試劑乙，立即搖勻，于25℃左右反應(yīng)30min，測定吸光值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線查出樣品蛋白質(zhì)含量。