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elisa酶聯(lián)免疫試劑盒
ScienCell細(xì)胞
標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
生化試劑
蛋白/抗體
免疫組化檢測(cè)試劑盒
Western Blot
擔(dān)體
食品檢測(cè)試劑盒
澳大利亞無(wú)菌血清
熒光定量PCR試劑/試劑盒
sigma/amersco進(jìn)口試劑
HPLC檢測(cè)/生化試劑盒
PCR檢測(cè)試劑盒
原代細(xì)胞
抑制劑

魚(yú)5-吡咯啉酶聯(lián)免疫分析試劑盒實(shí)驗(yàn)原理

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魚(yú)5-吡咯啉酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用目的:
本試劑盒用于測(cè)定魚(yú)血清、血漿及相關(guān)液體樣本中 5-吡咯啉(P5CRs)含量。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中魚(yú) 5-吡咯啉(P5CRs)(P5CRs)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中(P5CRs),再與 HRP標(biāo)記的  5-吡咯啉          (P5CRs)。用純化的魚(yú) 5-吡咯啉依次加入 5-吡咯啉抗體,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物  TMB 顯色。TMB  在HRP  酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的5-吡咯啉          (P5CRs)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中魚(yú) 5-吡咯啉(P5CRs)濃度。
魚(yú)5-吡咯啉酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作步驟
.  標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑?biāo)準(zhǔn)品一支,用戶(hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
2.  加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測(cè)樣品 0μl(樣品zui終稀釋度為 5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。
4.配液:將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水  30倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置 30秒后棄去,如此重復(fù) 5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。
7.溫育:操作同 3。
8.洗滌:操作同 5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色5分鐘.
0.終止:每孔加終止液    50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
.測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后 5分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。
魚(yú)5-吡咯啉酶聯(lián)免疫分析試劑盒注意事項(xiàng)
.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 5-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在 5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,使用排槍加樣。
4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本  OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請(qǐng)避光保存。
7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
0.如與英文說(shuō)明書(shū)有異,以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。
魚(yú)5-吡咯啉酶聯(lián)免疫分析試劑盒保存條件及有效期
.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個(gè)月

 

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