生化檢驗(yàn)中的各種空白概念

【資料簡(jiǎn)介】

1、試劑空白：

由于生化測(cè)試測(cè)量的吸光度為相對(duì)吸光度，所以從理論上說，所有終點(diǎn)法的測(cè)試都需要把試劑本身的吸光度扣除。試劑本身的吸光度就是 試劑空白。測(cè)量方法是按照正常測(cè)試的試劑和樣本量，把樣本換成蒸餾水來測(cè)量。

在傳統(tǒng)手工方法中,每次測(cè)定都要做至少三個(gè)管:測(cè)定管、標(biāo)準(zhǔn)管、空白管。其中空白管是試劑加蒸餾水，測(cè)出來也就是試劑空白。因?yàn)?操作環(huán)境、儀器狀態(tài)、試劑穩(wěn)定性等變異，所以要求每次都要測(cè)定試劑空白，稱為實(shí)時(shí)試劑空白。

在全自動(dòng)分析儀上，大體上是模擬手工操作。但許多全自動(dòng)分析儀為追求速度，在設(shè)計(jì)上采用一些折中方法來測(cè)定試劑空白。以日立全系 列生化儀為例。該系列分析儀是做不了實(shí)時(shí)試劑空白，因?yàn)樗鼈內(nèi)窍燃尤霕颖竞蠹釉噭?，為了折中，只好在定?biāo)時(shí)做一個(gè)試劑空白，保 存起來，需要扣除試劑空白時(shí)再減這個(gè)預(yù)先保存的值。這種做法，對(duì)于比較穩(wěn)定的試劑來講，對(duì)結(jié)果影響不大。

通俗的講，日立的儀器工作流程中首先是將標(biāo)本加入到比色杯中，然后依次加入R1試劑、R2試劑，所以試劑空白在每個(gè)測(cè)定項(xiàng)目曲線 中是無法看到的。但是7170從CALIBRATION中是可以看到的，S1ABS就是代表試劑空白吸光度，在CALIBRAT ION畫面里的下方找到Reaction Monitor（反應(yīng)監(jiān)察），其中STD（1）就是代表試劑空白反應(yīng)曲線.為了減小誤差，日立儀器會(huì)連續(xù)做兩次測(cè)定，所以你看到 FIRST和SECOND兩條，計(jì)算時(shí)是取他們的平均值。做試劑空白目的之一就是觀察試劑是否穩(wěn)定，積極采取措施糾正。對(duì)于日立 的這種試劑空白測(cè)定很多儀器都采用這種方法，也叫做試劑空白校準(zhǔn)。

總的說來，自動(dòng)生化儀上的試劑空白一般表現(xiàn)為零點(diǎn)吸光度，該吸光度是通過校準(zhǔn)確立的。

2、樣本空白：

由于溶血、脂血、黃疸等情況，會(huì)導(dǎo)致樣本本身的吸光度對(duì)測(cè)試結(jié)果造成影響。所以對(duì)樣本本身吸光度的測(cè)量，即樣本空白，可以去除這 方面的影響。測(cè)量方法是按照正常測(cè)試的試劑和樣本量，把試劑換成蒸餾水或生理鹽水來進(jìn)行測(cè)量。自動(dòng)生化儀上，很難界定樣本空白。 與消除樣本空白有關(guān)的大約有如下幾點(diǎn):

a）.在雙試劑測(cè)定時(shí)，加入試劑1和樣品后的吸光度可一定程度上扣除樣本空白，所以有單試劑不能扣除樣本空白的說法。
b）.現(xiàn)在的試劑的抗*力都比較強(qiáng)，比如有些雙試劑，R1加入后先和樣本孵育一段時(shí)間，將血紅蛋白、脂肪、*等反應(yīng) 掉，再加入R2開始測(cè)定反應(yīng)。在一定范圍內(nèi)都可以消除樣本空白。

c）.現(xiàn)代全自動(dòng)生化儀大多采用雙波長測(cè)定.雙波長測(cè)定的原則是根據(jù)干擾組分和待測(cè)物質(zhì)吸收光譜的峰形特征，選擇兩個(gè)波長和 ，使干擾組分在這兩個(gè)波長處的吸光系數(shù)相等，而使待測(cè)物質(zhì)在兩波長處的吸光系數(shù)有顯著差別。以兩波長分別測(cè)定分析溶液的吸光度， 以兩個(gè)吸光度值之差（△A）計(jì)算。這也可以扣除一部分樣本空白.

d）.有些儀器,例如日立系列,有專門的“血清信息”功能的設(shè)置。做法都是單 獨(dú)占用一個(gè)空白通道來計(jì)算，這也叫做樣品空白校準(zhǔn)。

3、水空白：

比色杯在加入水以后的吸光度。水空白的意義主要是對(duì)光路系統(tǒng)進(jìn)行檢查和校正，如光源，比色杯等，同時(shí)在計(jì)算中起到消除“杯差”的 作用。日立7060中的Cell Blank（杯空白）測(cè)定的就是水空白。