乙型肝炎核心抗體定性檢測

【資料簡介】

乙型肝炎核心抗體定性檢測

1．檢驗目的

檢測HBcAb主要是用于乙型肝炎的的診斷、了解乙肝病毒感染者的感染狀況，另外還用于乙型肝炎的流行病學調(diào)查。

2．方法原理

采用ELISA競爭法，反應板的瓊脂微孔包被基因工程重組HBcAb，加入待測血液，同時單克隆抗-HBc-HRP，與抗原形成競爭結(jié)合，如待測標本中抗-HBc含量高，則抗-HBc-HRP與HBcAg結(jié)合少，加入底物TMB時顯色淡，反之則顯色深。

3.性能指標

此方法快速簡便、特異性強、檢測靈敏度度0.5ng/ml。

4．標本收集

4．1標本類型：靜脈血或動脈血的血清或血漿標本均可作為檢測標本（抗凝劑可用*、*、ACD、CPDA-1或EDTA，抗凝劑的質(zhì)量應符合化試藥品要求——化學純或分析純，使用的比例以廠家推薦為準）；其他體液如尿液、唾液、精液、羊水、胸水、腹水、乳汁等體液可以作為檢測標本，但加熱滅活的血清和血庫的庫存血則不宜作為檢測標本。

4．2標本留取：以空腹為宜，收到標本后立即離心留取血清或血漿（凝固血應待其充分凝固后收集血清），不能有殘留的紅細胞、纖維蛋白絲，使用肝素治療的病人宜在肝素治療前抽血。

4．3標本保存：留取的標本在3小時內(nèi)檢測，不能立即檢測的應放置于2-8℃zui長達14天（可以含有凝塊但要密閉以防蒸發(fā)），或者-10℃zui長達14天（不能反復凍融也不能含有凝塊和紅細胞）。

4．4標本容器：盛放標本的容器必須為潔凈的*、玻璃試管、一次性的不同規(guī)格的塑料離心管

4．5標本外送：如涉及到需要外送的標本，必須以規(guī)定的容器（0.5ml塑料離心管）存放并密封，并根據(jù)郵寄規(guī)則和要求進行包裝，運送時還要放入冰袋（2-8℃）或干冰（-10℃）由專人運送至地點接收人。

4．6拒收標本：凡與4.1-4.5所述內(nèi)容不符的標本，檢驗人員應向臨床或就診者說明拒收標本的原因，并提出解決的方案或建議。

5．分析系統(tǒng)

5．1分析儀器：為美國BIO-RAD公司提供的MODEL550型酶標儀，儀器校準請參見儀器操作規(guī)程。

5．2分析試劑：為上?？迫A公司提供的配套的HBcAb試劑盒，規(guī)格為96test/盒，2-8℃貯存，有效期12個月；在效期內(nèi)使用試劑。

5．3質(zhì)控試劑：為上海公司提供的配套的HBcAb試劑盒中所附帶的陰、陽性對照，2-8℃貯存，有效期12個月每月一次質(zhì)控小結(jié)，失控要有記錄及糾正的結(jié)果。

6．操作方法

6．1每孔加入待測標本50微升。

6．2每孔加入酶結(jié)合物1滴，充分混勻，封板，置37℃孵育30分鐘。

6．3手工洗板：棄去孔內(nèi)液體，洗滌液注滿各孔，靜置5秒，甩干，重復5次后拍干。洗板機洗板：選擇洗滌5次程序洗板后拍干。

6．4每孔加顯色劑A液、B液各1滴，充分混勻，封板，置37℃ 孵育才1５分鐘。

6．5每孔加入終止液1滴，混勻。

6．６用酶標儀讀數(shù)，數(shù)值取波長450nm（建議使用雙波長的酶標儀比色，參考波長630nm），先用空白孔校零，然后讀取各孔OD值。

7．質(zhì)量控制操作程序

7．1每次實驗設陰性、陽性各2孔，并設空白對照1孔隨常規(guī)標本一起檢測。

7．2質(zhì)控結(jié)果登記到本年度的“免疫室定性檢測項目室內(nèi)質(zhì)控登記表”。

7．3一旦發(fā)現(xiàn)失控，應即時查找和分析原因，并在該結(jié)果欄作詳細的批注和記錄解決的過程；失控情況處理及原因分析詳見8“失控處理”。

7．4每月進行質(zhì)控小結(jié)。并將原始數(shù)據(jù)打印和存盤留檔。

8．失控處理操作程序

8．1失控情況處理：操作者在分析質(zhì)控結(jié)果時，如發(fā)現(xiàn)質(zhì)控違背了控制規(guī)則，應填寫失控報告單，上交專業(yè)室主管（組長），由專業(yè)室主管（組長）做出是否發(fā)出或重測與質(zhì)控品相關(guān)的該批次病人標本檢驗報告的決定。

8．2失控原因分析：失控信號的出現(xiàn)受多種因素的影響，這些因素包括操作上的失誤、試劑、對照物的存貯條件改變、儀器維護不良以及采用的質(zhì)控規(guī)則、控制范圍、一次測定的質(zhì)控標本數(shù)等等。失控信號一旦出現(xiàn)就意味著與測定質(zhì)控品相關(guān)的該批病人標本報告可能作廢，此時首先要查明導致失控的原因，是對照物本身的原因還是對照物以外的原因。如是對照物以外的原因則應判為真失控，與對照物相關(guān)的同批次病人標本重新檢測；如是對照物本身的原因，則判為假失控，與對照物相關(guān)的同批次病人標本不必重測，可以發(fā)出報告。當失控信號出現(xiàn)時，可以采取以下步驟去尋找原因：

8．2．1立即重測同一對照物。此法主要用于查明人為誤差，每一步都應該認真仔細的操作，以查明失控的原因；另外，這一步還可以查出偶然誤差，如是偶然誤差，則重測的質(zhì)控結(jié)果應在允許范圍（在控），可以認為該批次的病人標本不必重測。如仍不在允許范圍則可以進行下一步。

8．2．2新開一瓶對照物，重測失控項目。如果新開的對照血清結(jié)果正常，那么原來那瓶對照血清可能過期或在室溫放置時間過長而變質(zhì)，或者被污染，此時可以認為該批次病人標本不必重測。如仍不在允許范圍則可以進行下一步。

8．2．3進行儀器維護，重測失控項目。檢查儀器狀態(tài)，檢查光源是否更換，對儀器進行清洗維護，然后再測質(zhì)控品，如在控，則說明是儀器原因，該批次的病人標本應重測。如仍不在允許范圍則可以進行下一步。

8．2．4更換另一試劑盒，重測失控項目。檢查試劑是否過期或貯存環(huán)境，更換試劑盒重新檢測對照物，如在控則說明試劑存在問題，該批次病人標本應重測。如仍不在允許范圍則可以進行下一步。

8．2．5請專家?guī)椭?。?步都未能得到在控結(jié)果，如果其他同類型檢驗項目在控，則需要試劑廠家尋求技術(shù)幫助；如果其他同類型項目也失控，則需要與儀器廠家工程師取得了。