大鼠內(nèi)皮素*說(shuō)明書(shū)

【資料簡(jiǎn)介】

 大鼠內(nèi)皮素*說(shuō)明書(shū)

【藥品名稱】

通用名稱：碘[¹²⁵ I]大鼠內(nèi)皮素*

英文名稱：Iodine[¹²⁵I]Endothelin Radioimmunoassay Kit

漢語(yǔ)拼音：Dian [¹²⁵I] Dashu Neipisu  Fangshemianyifenxi  Yaohe

【適應(yīng)癥】

概述及臨床意義：內(nèi)皮素（endothelin ，ET）是一種首先由豬的血管內(nèi)皮細(xì)胞中分離純化出的21個(gè)氨基酸組成的生物活性多肽，大鼠的ET有多種基因表達(dá)，包括ET-1，ET-2，ET-3，其中以ET-1活性zui強(qiáng)。內(nèi)皮素具有強(qiáng)烈的收縮冠狀動(dòng)脈，腎小動(dòng)脈，刺激心鈉素（ANP）的釋放，提高全身血壓，抑制腎素釋放等作用，它是迄今為止已知zui強(qiáng)的收縮血管物質(zhì)?，F(xiàn)有研究表明，大鼠ET濃度的研究與心血管疾病、呼吸系統(tǒng)疾病、消化系統(tǒng)疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病以及婦產(chǎn)科疾病的發(fā)生發(fā)展均有密切。

測(cè)定原理：      利用液相競(jìng)爭(zhēng)抑制原理，采用非平衡法對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)定。先將待測(cè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)與*的抗血清加在一起反應(yīng)一段時(shí)間后，再加入標(biāo)記抗原進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合反應(yīng)，反應(yīng)*后，加入免疫分離劑，分離出抗原-抗體復(fù)合物，測(cè)定復(fù)合物的放射性（B），計(jì)算各標(biāo)準(zhǔn)管的結(jié)合率（B/B0﹪）。作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，查出樣品濃度。

【成份】

藥盒組成及配制

1、緩沖液（PBS）：1瓶（液體），10ml，用前加蒸餾水稀釋至50ml。

2、ET標(biāo)準(zhǔn)品：5瓶（白色，凍干粉），每瓶用前加緩沖液    ml溶解，（如不填寫，每瓶加1ml溶解）濃度為20，60，180，500，1000pg/ml。

3、ET抗血清：1瓶（白色，凍干粉），用緩沖液     ml溶解，（如不填寫，100T藥盒加 10.5ml溶解，50T藥盒加 5.5ml溶解）。

4、¹²⁵I –ET：1瓶（白色，凍干粉），用緩沖液     ml溶解，（如不填寫，100T藥盒加10.5ml溶解，50T藥加5.5ml溶解）。

5、PR分離劑：1瓶（液體），100T藥盒60ml，50T藥盒30ml 使用前充分搖勻，直接使用。

樣品收集

1、血漿：取全血2ml，注入含7.5﹪EDTA二鈉30μl和*40μl的試管中,混勻（可按比例增加或減少取血量），4℃3000rpm離心，10min，分離血漿。放-20℃，樣品可保存2個(gè)月，在-70℃以下可存放半年。測(cè)定前使樣本置于室溫或冷水中復(fù)融，再次4℃3000rpm離心，5 min，取上清測(cè)定 。

注：4萬(wàn)KIU/ml的*（2ml/瓶）與7.5﹪EDTA二鈉（2ml/瓶）需用戶自備。若用戶自備困難我公司可提供。每套價(jià)格400元人民幣。

注：測(cè)定兔血漿時(shí)，應(yīng)改用25﹪PEG 500μl作分離劑，離心前NSB、S₀、 S ₁– S₅管補(bǔ)加γ球蛋白100μl，樣品管加PBS各100μl，然后再加25﹪PEG 500μl。測(cè)兔血漿時(shí)每個(gè)標(biāo)本或每組做一個(gè)U₀，25﹪PEG和γ球蛋白由我公司提供。

2、組織：取出活組織，吸去血跡，稱重，盡快加入生理鹽水1ml碾磨，制成勻漿， 4℃3000rpm離心，15min，取上清，-20℃以下保存。測(cè)定前做預(yù)實(shí)驗(yàn)確定樣品稀釋度?？扇?/span>3-5份做小樣，將樣品做原倍，1：5，1：20倍稀釋，選擇合適的稀釋度。    

另外，每種組織的樣品非特異結(jié)合（U₀）可能有些差異，每份標(biāo)本單獨(dú)做一個(gè)U₀或每組做一個(gè)U₀。取組織的重量一般在300～400mg左右為好。

測(cè)定方法

    本實(shí)驗(yàn)采用非平衡法，取聚苯乙烯試管編號(hào)，按下表操作：

                                        ET RIA加液程序（μl）

T        NSB        S0        S 1– S5       樣品       U0

緩沖液      –        200        100          –           –        100 標(biāo)準(zhǔn)液      –         –          –          100          –         –   待測(cè)樣品    –         –          –           –          100       100 抗血清      –         –         100         100         100        –

充分混勻，4℃放置 24h

125I - ET       100           100        100         100         100       100

充分混勻，4℃放置 24h

PR分離劑    –        500        500         500         500       500

混勻，室溫放置15min，4℃3500rpm離心  20min，吸棄上清，測(cè)各管沉淀cpm數(shù)

結(jié)果計(jì)算

1、以B/T計(jì)算NSB、S₀結(jié)合百分率，以B/BO計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)及待測(cè)樣品結(jié)合百分率，在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并查出樣品值?；蛴勺詣?dòng)γ計(jì)數(shù)器預(yù)先編制程序，直接給出有關(guān)參數(shù)，標(biāo)準(zhǔn)曲線及樣品濃度。

NSB％＝（NSB管的cpm數(shù)÷T管的cpm數(shù)）×100％

       Bo％＝（Bo管的cpm數(shù)－NSB管的cpm數(shù)）÷T管的cpm數(shù)×100％

B／Bo％＝（標(biāo)準(zhǔn)或樣品管的cpm數(shù)－NSB管的cpm數(shù)）÷（Bo管的cpm數(shù)－NSB管的cpm數(shù)）×100％

2、組織樣品得出樣品濃度后，再根據(jù)稱取組織量，計(jì)算出每mg組織中的量。尿液樣品從每ml濃度再計(jì)算出每小時(shí)或每分鐘排出量。

主要技術(shù)指標(biāo)

1、NSB﹤5﹪

2、靈敏度:5pg/ml

3、標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍20～1000pg/ml

4、批內(nèi)變異系數(shù)﹤10﹪，批間變異系數(shù)﹤15﹪

5、特異性：本抗體與ɑ-人心鈉素,降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）,血管緊張素Ⅰ、Ⅱ以及舒血管腸肽（VIP）等均無(wú)交叉反應(yīng)。

正常血漿參考值

建議各實(shí)驗(yàn)室根據(jù)自己的條件建立自己的大鼠正常對(duì)照組。

【放射性核素半衰期】 

碘[¹²⁵I]物理半衰期（T½）:60天

【注意事項(xiàng)】

1、使用本藥盒的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具有“放射性同位素使用許可證”，使用過(guò)程中產(chǎn)生的放射性廢物應(yīng)按國(guó)家有關(guān)規(guī)定處理

2、PR試劑在使用前需充分混勻，必要時(shí)邊加邊混，不可冰凍保存。

3、如果用戶測(cè)定的樣品是兔血漿，請(qǐng)?jiān)谟喫幒袝r(shí)提前告知。

4、標(biāo)記品不要提前配制，請(qǐng)?jiān)谛杓訕?biāo)記的當(dāng)天配制。

5、用戶如遇特殊情況，收到藥盒后不能在當(dāng)月使用，請(qǐng)您將標(biāo)準(zhǔn)品、抗血清冷凍保存，緩沖液、分離劑、*4℃保存，          7.5﹪EDTA二鈉室溫保存，若出現(xiàn)沉淀，加熱即可溶解，待下次只單購(gòu)一瓶標(biāo)記即可。

6、藥盒內(nèi)任何一種試劑均可單獨(dú)購(gòu)買。

7、本藥盒每月快件寄出，一般在月底寄下月產(chǎn)品，用戶請(qǐng)?jiān)诿吭?/span>20日前通知我們，以便及時(shí)寄出。

【貯藏】

常溫運(yùn)輸，4℃保存

【有效期】

45天

【執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)】

*通則

【批準(zhǔn)文號(hào)】

國(guó)藥準(zhǔn)字 S 10950212