大鼠磷酸肌醇3激酶（PI3K）試劑盒說明書

【資料簡介】

大鼠磷酸肌醇3激酶（PI3K）操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
240 pmol/L 5 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
120 pmol/L 4 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
60 pmol/L 3 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
30 pmol/L 2 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
15 pmol/L 1 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、
待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，
然后再加待測樣品 10μl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30 分鐘。    
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30秒后棄去，如此
重復(fù)5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50 μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止
液后15分鐘以內(nèi)進行。

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