ELISA試劑操作中容易出現(xiàn)的問題

【資料簡(jiǎn)介】

問題	可能原因	防止方法
（一） 顯色淡 靈敏度偏低	1．試劑盒在運(yùn)輸途中時(shí)間太長(zhǎng)，溫度太高	試劑盒置保溫箱內(nèi)運(yùn)輸，并放足夠數(shù)量的冰塊，盡量縮短運(yùn)輸時(shí)間
	2．試劑盒超過有效期	超過效期試劑盒不要使用
	3．試劑、樣品用前未能平衡	用前試劑、樣品置室溫平衡 30分鐘左右
	4．試劑開啟時(shí)間過長(zhǎng)長(zhǎng)菌	試劑開啟后請(qǐng)盡量在短時(shí)間內(nèi)用完
	5．移液器吸量不足，移液抽吸排放太快，吸頭內(nèi)壁掛液太多或內(nèi)壁不清潔	校正移液器，吸頭要配套，每次裝吸頭要吻合緊密。移液不宜過快，排放應(yīng)*。吸頭內(nèi)壁要清潔，一次性使用。
	6．恒溫箱溫度不足37℃或水浴鍋水溫度不足37℃）	放入反應(yīng)板時(shí)注意培養(yǎng)箱溫度，及時(shí)調(diào)整，孵育反應(yīng)期間開啟不宜太多，影響溫度平衡。
	7．孵育反應(yīng)時(shí)間不足	定時(shí)鐘準(zhǔn)確定時(shí)
	8．洗滌時(shí)沖擊力太大，洗滌液浸泡時(shí)間太長(zhǎng)，洗滌次數(shù)增加	減少洗滌沖擊力，按說明書要求保留洗滌時(shí)間，準(zhǔn)確記住洗滌次數(shù)
	9．顯色劑滴加量不足或順序顛倒，或混合后加入	滴加顯色液時(shí)，滴瓶垂直向下，持力均勻，滴速不宜過快，先加顯色劑 A，反加顯色劑B，不可將A、B液混合后加入
	10．顯色劑反應(yīng)時(shí)間不足	準(zhǔn)確定時(shí)
	11．蒸餾水水質(zhì)有問題	測(cè)定蒸餾水配制試劑對(duì)酶免疫法的影響
	12．樣品和NaN 3 防腐，抑制了酶的反應(yīng)	樣品不能加 NaN 3 防腐
（二） 重復(fù)性差	1．對(duì)于定量產(chǎn)品，沒帶標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品，采用以前的標(biāo)準(zhǔn)線	每次試驗(yàn)都必須帶標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品
	2．樣品數(shù)量多少不一，加樣時(shí)間有長(zhǎng)有短	重復(fù)某一樣品時(shí)，加樣時(shí)間盡可能與*次接近
	3．樣本加入后未混勻	加樣后在混勻器上充分混勻
	4．移液器加樣量不一致	盡可能使用同一移液器和裝緊吸頭移液時(shí)用力及抽吸速度一致
	5．酶標(biāo)儀濾光片不對(duì)或輸入波長(zhǎng)不對(duì)	TMB顯色用450或450/630nm雙波長(zhǎng)
	6．酶標(biāo)儀測(cè)定重復(fù)性差	校準(zhǔn)酶標(biāo)儀
	7．操作過程個(gè)別孔液體外濺	穩(wěn)拿穩(wěn)放，防止外濺
	8．不同批號(hào)試劑盒中組分混淆	不同批號(hào)試劑，不能混用
	9．瓶蓋相互交叉使用	不同組分瓶蓋間不能交叉使用
	10．獻(xiàn)血員冒名頂替	嚴(yán)格管理獻(xiàn)血員
	11．保溫時(shí)間不一致	重復(fù)測(cè)定標(biāo)本，反應(yīng)條件、人員等盡可能與上次保持一致，以排除這些因素造成不一致的可能性，計(jì)時(shí)應(yīng)以*滴 TMB的B液加入開始計(jì)時(shí)
	12．洗滌條件不一致
	13．顯色條件時(shí)間不一致
	14．操作人員不一致
	15．洗滌不正確	用洗液注滿各孔，但不要溢出。甩板時(shí)反應(yīng)板面向下，垂直用力甩凈內(nèi)容物（可多甩幾次），在干凈、無或少塵的吸水材料上拍干。洗板機(jī)洗板時(shí)不應(yīng)有堵孔，洗滌應(yīng)充分
	16．溫育條件不一致（一次用水浴，一次用恒溫箱）	恒溫箱溫育較水浴顯色深， OD值高出0.10-0.15,均采用恒溫箱，沒有恒溫箱者，水浴鍋的水溫應(yīng)控制在37℃
	17．唾液或其它雜物掉入孔內(nèi)	用記號(hào)筆直圈上，便于分析
	18．不慎加酶或底物液于孔壁上，有殘留	用吸水紙吸干壁上殘留的酶或底物液
	19．不慎多加或少加酶或顯色劑B	多加時(shí)顯色深，少加則淺，用記號(hào)筆圈上，便于分析
	20．閾值附近時(shí)陰時(shí)陽	重復(fù)做奇數(shù)次，以偶數(shù)次結(jié)果為準(zhǔn)
	21．標(biāo)本離心處理不全，致使檢測(cè)時(shí)于反應(yīng)板孔內(nèi)發(fā)生凝血現(xiàn)象或殘留細(xì)胞成分干擾	血清或血漿應(yīng)充分離心處理， 3000rpm6分鐘以上