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免費代測人腎損傷分子 ELISA 檢測試劑盒

2013年12月19日 09:25:06人氣:269來源:上海通蔚生物科技有限公司

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關(guān) 鍵 詞人腎損傷分子 ELISA 檢測試劑盒
【資料簡介】

本試劑僅供研究使用  標本:尿液

 

試驗原理:

KIM-1試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知KIM-1濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將KIM-1和生物素標記的抗體同時溫育。人腎損傷分子 ELISA 檢測試劑盒洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中KIM-1的濃度呈比例關(guān)系。

自備材料

1. 蒸餾水。

2. 加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。

3. 振蕩器及磁力攪拌器等。

 

安全性

1. 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。

2. 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

 

操作注意事項

1. 試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。

2. 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。

3. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

4. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。

5. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

6. 洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

7. 底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

8. 加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

9. 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

 

樣品收集、處理及保存方法

1、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、 保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

 

試劑的準備

標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。

1. 洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。

 

操作步驟

1. 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。

2. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復孔的盡量做復孔。

3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。

4. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。

5. 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。

6. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。

7. 每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。

8. 取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結(jié)果。

9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。


局限

6號標準品以上的結(jié)果為非線性的,人腎損傷分子 ELISA 檢測試劑盒根據(jù)此標準曲線無法得到的結(jié)果。

 

試劑盒性能

1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。

2. 特異性:不與其它細胞因子反應。

3. 重復性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

 

結(jié) 果 判 斷 與 分 析

1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

 

2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的KIM-1標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的KIM-1含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

 

3、檢測值范圍:0-800pg/ml

 

4、敏感度: 1.0 pg/ml

A139695 辛基三嗪酮相關(guān)物質(zhì)C標準品 20mg 乙基己基三嗪酮相關(guān)物質(zhì)C
A139696 氟替卡松丙酸酯相關(guān)物質(zhì)混合物標準品 25mg NA 
A139697 氟替卡松丙酸酯鼻噴劑分離度用混合物標準品 25mg NA 
A139698 醋酸戈那瑞林雜質(zhì)標準品 10mg NA 
A139699 重組蛋白A標準品 ea NA 
A139700 卡巴拉汀酒石酸鹽K-異構(gòu)體 20mg NA 
A139701 群勃龍醋酸酯系統(tǒng)適用性混合物 30mg NA 
A139702 依諾肝素鈉溶液用于生物測定標準品 1ml NA
A139703 胺碘酮相關(guān)物質(zhì)E標準品 Amiodarone Related Compound E 25mg Amiodarone R...
A139704 尼泊金甲酯標準品 Methylparaben  125mg 99-76-3 
A139705 丙戊酸相關(guān)物質(zhì)A標準品 0.25ml 99-67-2 
A139706 水楊酸相關(guān)物質(zhì)A標準品 100mg 9-96-7 
A139707 丙戊酸標準品 Valproic Acid  500mg 99-66-1 
A139708 昂丹司瓊雜質(zhì)D標準品 30mg 99614-64-9 
A139709 昂丹司瓊標準品 Ondansetron  300mg 99614-02-5 
A139710 瑞格列奈相關(guān)物質(zhì)B標準品 人腎損傷分子 ELISA 檢測試劑盒 50mg 99469-99-5 
A139711 鹽酸文拉法辛標準品 Venlaine Hydrochloride  100mg 99300-78-4 
A139712 酒石酸唑吡坦標準品 Zolpidem Tartrate CIV 200mg 99294-93-6 
A139713 堿式?jīng)]食子酸鉍標準品 Bismuth Subgallate (AS) 2g 99-26-3
A139714 克拉霉素混合物R標準品 10mg 992-62-1

上海通蔚生物科技有限公司作者

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