人顆粒酶-B酶點檢測

【資料簡介】

人顆粒酶-B酶點檢測

     酶點（ELISPOT）技術(shù)是zui近幾年發(fā)展起來應(yīng)用于抗病毒免疫和抗腫瘤免疫的一種新型測定方法。
     Sanquin 提供的顆粒酶-B酶點檢測試劑盒應(yīng)用技術(shù)，靈敏度高，僅一個陽性細胞即可測到存在的顆粒酶-B。特異性強，結(jié)果重復(fù)性好。為抗病毒和抗腫瘤研究提供新型強有力的檢測工具。
酶點技術(shù)與酶標技術(shù)比較
1、酶點技術(shù)明顯的特點是靈敏度增加
2、酶點技術(shù)僅需要1 個陽性細胞 / 孔即可,靈敏度達到1 :1,000,000的陽性準確分析
3、酶標技術(shù)需要至少要有400 細胞 / 孔才可達到有意義的檢測水平
4、能在單細胞水平上分析產(chǎn)生細胞因子的T細胞
顆粒酶-B介紹
       顆粒酶是外切*蛋白酶，來自細胞毒T淋巴細胞（CTLs）和自然殺傷細胞（NK）釋放的細胞漿顆粒。這些顆粒含有顆粒酶原及其它蛋白酶原，包括穿孔蛋白。由于CTL細胞與靶細胞結(jié)合（經(jīng)CTL受體和靶細胞表面的抗原肽-MHCⅠ類分子復(fù)合物結(jié)合），通過顆粒的胞吐過程，顆粒酶進入了靶細胞，穿孔蛋白在細胞膜聚合而進入靶細胞形成跨膜的小孔，使靶細胞膜穿孔。穿孔蛋白通過使粒酶-內(nèi)體膜穿孔釋放出粒酶。顆粒酶B激活了細胞內(nèi)caspases反應(yīng), zui后引起靶細胞的死亡.  顆粒酶A也能誘發(fā)靶細胞的凋亡。
在許多疾病中，用流式細胞術(shù)和免疫細胞可測定顆粒酶B陽性的CTL百分比。 部分顆粒酶也可 “漏”入外周血液和其它體液。 在健康者體內(nèi)也可測得顆粒酶。.這些可溶性的顆粒酶可以用ELISA測定。
PeliSPOT人顆粒酶 B 試劑盒用于重復(fù)性 特異性定量測定人CTL細胞和NK細胞分泌釋放的顆粒酶B頻數(shù)。
     方法
細胞孵育在預(yù)包被的微孔板內(nèi)過夜，微孔內(nèi)有預(yù)包被的高親和力抗顆粒酶-B單克隆抗體。分泌的顆粒酶-B與預(yù)包被的抗顆粒酶-B抗體結(jié)合。洗滌去除未結(jié)合的成分，然后加入*標記的抗顆粒酶-B抗體。分別加鏈霉親和素—HRP 聚合物和底物，存在分泌的細胞因子處可見有藍色/ 紫色的斑點。
    顆粒酶-B臨床意義
病毒感染  EBV, HIV, CMV, 肝炎病毒和登革熱病毒感染可增強患者CTL反應(yīng)，體內(nèi)可溶性顆粒酶含量增加。
淋巴瘤和肉瘤  何杰金病等淋巴瘤患者顆粒酶B濃度增高。
風濕性關(guān)節(jié)炎  可溶性顆粒酶B 在風濕性關(guān)節(jié)炎患者滑液中比原發(fā)性全身性骨關(guān)節(jié)病明顯升高。
移植  顆粒酶涉及腎臟移植后的急性排斥。浸潤性淋巴細胞強烈表達血漿可溶性顆粒酶, 腎移植病人血漿可溶性顆粒酶水平升高提示系統(tǒng)性病毒感染, 如CMV 感染