培養(yǎng)基的配制

【資料簡介】

一、儀器設備及試劑
電爐
天平（0.0001 g）
高壓滅菌鍋
量筒：l0 ml、20 ml、100 ml、500 ml
燒杯：1000 ml、500 ml、250 ml
移液管：1 ml、2 ml、 5 ml
吸管若干、記號筆
三角瓶或試管、試管架
錫鉑紙、玻璃棒
配制好的各種母液，如大量元素母液、微量元素母液、鐵鹽、有機物、生長調節(jié)劑等，個別生長調節(jié)劑要隨配隨用。
蒸餾水、pH試紙
蔗糖、瓊脂 等
          1 mol/L NaOH 溶液、1 mol/L HCl溶液 。
  二、方法和步驟
1 量取所配培養(yǎng)基總體積的2/3體積的蒸餾水，如要配l升培養(yǎng)基, 先量取約700 ml體積的水。
        2 根據(jù)培養(yǎng)基配方， 用量筒量取所需要的各種元素的母液。
 

物質	加入體積或重量
大量元素母液(10×)	100ml
微量元素母液(1000×)	1 ml
有機物質母液(1000×)	1 ml
鐵鹽母液(1000×)	10 ml
蔗糖	30 g
瓊脂	8 g

吸取母液時，注意應先將幾種母液按順序排好，不要弄錯以免使培養(yǎng)基中藥品成分發(fā)生改變。在培養(yǎng)不同的外植體時，應加入不同的激素，如本實驗中培養(yǎng)康乃馨側芽或莖段時就加入1ml的1 mg/ml的6-BA；而另一個實驗胡蘿卜愈傷組織培養(yǎng)中應加入2ml的1 mg/ml的2,4-D。加入一種母液后應先攪拌均勻，避免因不均而使局部濃度過高而引起沉淀，瓊脂可于加入蔗糖調節(jié)完pH值后再加入，此時應注意攪拌，以免瓊脂或蔗糖沉淀于燒杯底而炭化。加熱至沸騰片斷，以使瓊脂充分溶解，檢查時可注意燒杯內溶液是否透明。
      3 調節(jié)培養(yǎng)基的pH值，用pH計或pH試紙測定
培養(yǎng)基的pH按照培養(yǎng)材料的要求分別用       1 mol/L NaOH溶液、1 mol/L HCl溶液來調節(jié)所配制培養(yǎng)基的pH值，一般培養(yǎng)基的pH值約為5.8，培養(yǎng)的材料不同，對培養(yǎng)基的pH值要求也不同。
4 分裝   將配制好的培養(yǎng)基分別裝在事先洗凈的三角瓶，用錫鉑紙封口，注明標簽，然后和用牛皮紙或報紙包好的培養(yǎng)皿及用三角瓶裝好的蒸餾水一道進行高壓滅菌。
          5 培養(yǎng)基的滅菌   一般用手提式醫(yī)用高壓鍋來滅菌（方法略），本實驗采用全自動高壓滅菌鍋。
6 培養(yǎng)基的保存   消毒過的培養(yǎng)基通常放在接種室或培養(yǎng)室中保存，一般 應在消毒后的兩周內用完，不要超過一個月。
 
三、注意事項
激素應在調節(jié)pH之前加入，因為有些激素是用酸或堿溶解的，在調節(jié)pH好之后加入會改變pH值。pH過酸或過堿對培養(yǎng)基均是不利的，會導致過軟或過硬的結果，從而影響培養(yǎng)質量。
在本次實驗中將下次實驗所需的其它材料一同滅菌處理。