蛋白質(zhì)染色中常用染色液分析

【資料簡介】

蛋白質(zhì)染色中常用染色液分析

染色液種類繁多，各種染色液染色原理不同，靈敏度各異。使用時可根據(jù)需要加以選擇。常用的染色液有：

1．氨基黑10B(amino black 10B又稱為amidoschwarz 10B或naphthalene blueblack，2B 200)氨基黑10B分子式為C22H13N6S3Na3，MW=715，λmax=620-630nm，是酸性染料。其磺酸基與蛋白質(zhì)反應(yīng)構(gòu)成復(fù)合鹽，是zui常用的蛋白質(zhì)染料之一，但對SDS-蛋白質(zhì)染色效果不好。另外，氨基黑10B染不同蛋白質(zhì)時，著色度不等、色調(diào)不一(有藍、黑、棕等)；作同一凝膠柱的掃描時，誤差較大。

2．考馬斯亮藍R250(coomassie brilliant blue R250，簡稱CBBR250或PAGE blue83)

考馬斯亮藍R250的分子式為C14H44O7H3S2Na，MW=824，λmax=560-590nm。染色靈敏度比氨基黑高5倍。該染料是通過范德瓦爾鍵與蛋白質(zhì)結(jié)合，尤其適用于SDS電泳微量蛋白質(zhì)染色，但蛋白質(zhì)濃度超過一定范圍時，對高濃度蛋白質(zhì)染色不合乎Beer定律，作定量分析時要注意這點。

3．考馬斯亮藍G250(簡稱CBBＧ250或PAGE blue G90，又名xylene brilliant cyanin G)

考馬斯亮藍G250比CBB R250多二個甲基。MW=854，λmax=590-610nm。染色靈敏度不如R250，但比氨基黑高3倍。其優(yōu)點是在三氯乙酸中不溶而成膠體，能選擇地使蛋白質(zhì)染色而幾乎無本底色，所以常用于重復(fù)性好和穩(wěn)定的染色，適于作定量分析。

4．銀染色法

此法是Switzer.R.C和Merril.CR首先提出的，它較CBB R250靈敏100倍。但染色機制

尚不清楚，可能與攝影過程Ag+的還原相似。其靈敏度很高，牛血清為4×10-5μg/mm2，即清蛋白為8×10-5μg/mm2，cyt C為1.7×10-4μg/mm2，因此也常用于凝膠電泳蛋白質(zhì)染色。

上海勁馬生物表示經(jīng)醋酸纖維、瓊脂(糖)、聚丙烯酰胺電泳分離的各種生物分子需用染色法使其在支持物相應(yīng)位置上顯示出譜帶，從而檢測其純度、含量及生物活性。蛋白質(zhì)、糖蛋白、脂蛋白、核酸及酶等均有不同的染色方法