基因工程ELISA試劑盒對(duì)免疫測(cè)定技術(shù)發(fā)展的影響

【資料簡(jiǎn)介】

    目前，分子生物學(xué)正在并zui終肯定會(huì)讓我們對(duì)整個(gè)生命科學(xué)有一個(gè)全面而*的認(rèn)識(shí)，其對(duì)免疫測(cè)定技術(shù)發(fā)展的影響也是直接而又有效的，它使我們對(duì)以前一些難以檢測(cè)的生物活性物質(zhì)的測(cè)定變得輕而易舉，并且大大提高了檢測(cè)的靈敏度和特異性。

1、免疫測(cè)定技術(shù)的基礎(chǔ)在于抗原抗體之間的特異結(jié)合反應(yīng)，所以任何的診斷試劑離不開(kāi)的原料，如抗原抗體，酶等。以前用于免疫測(cè)定的抗原通常為各種純化抗原，而抗體則為純化抗原免疫動(dòng)物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術(shù)得到的單克隆抗體，而抗原或抗體的標(biāo)記物如酶標(biāo)結(jié)合物則通過(guò)各總化學(xué)合成方法制備。近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結(jié)合物等免疫測(cè)定試劑幾成為現(xiàn)實(shí)的新一代試劑，各種新型使用的測(cè)定方法也不斷出現(xiàn)。

提高檢測(cè)的靈敏度，應(yīng)用Parl  Ehrich 學(xué)說(shuō)（PEI）HBsAg標(biāo)準(zhǔn)品，對(duì)ad標(biāo)準(zhǔn)品的靈敏度為0.05nｇ/ml對(duì)ay標(biāo)準(zhǔn)品靈敏度為0.025ng/ml

2、基因工程

較早用于免疫測(cè)定的基因工程抗原是HBcAg和HBsAg,這兩種基因工程抗原的出現(xiàn)，較好地解決了抗HBc和HBe的測(cè)定問(wèn)題。因?yàn)橐獜牟《颈旧砣ゴ罅揩@取這兩種純抗原較為困難，并且這一點(diǎn)對(duì)于難培養(yǎng)的病原微生物來(lái)說(shuō)，如HIV、HCV和梅毒螺旋體等都有些共性。

2.1  HCV-ELISA試劑盒

HCV目前尚不能體外培養(yǎng)，只能用基因工程或化學(xué)合成方法獲取HCV結(jié)構(gòu)和非結(jié)構(gòu)區(qū)的各種抗原片斷，已知HCV基因組有7個(gè)功能區(qū)組成：核心、E1、E2/NS1 NS2 NS3 NS4 NS5（有分為NS和NS5b）區(qū)，合成抗原的優(yōu)點(diǎn)是易于純化，特異性好，抗原抗體反應(yīng)強(qiáng)。

2.1.1  *代抗HCV-ELISA試劑盒：

-由美國(guó)ortho公司克隆C1003抗原幾個(gè)片斷與人超氧化物歧化酶（SOD）結(jié)合。ELISA試劑盒用酵母從病毒基因組非結(jié)合區(qū)得到表達(dá)，表達(dá)為融合蛋白，亦作為包被固相載體。

-抗原組合：NS4 區(qū)二個(gè)基因片斷為NS 5-1-1和C1003

-特性：IgG抗C100在發(fā)病后數(shù)月后，才檢出，故不宜作早期診斷。

-約由20%的病人不出現(xiàn)抗體。IgM抗-C100急性期檢出率只有64%。

-C100的抗原性較弱，在HCV復(fù)制中，不能充分暴露宿主的免疫系統(tǒng)。

-特異性和靈敏性較差。

2.1.2  第二代HCV-ELISA試劑盒

-用基因重組的HCV結(jié)構(gòu)蛋白與非結(jié)構(gòu)蛋白抗原包被固相載體。

-抗原組合：核心區(qū)（C區(qū)）多肽C22  NS區(qū)多肽C33  C1003和NS 5-1-1

-增加C22區(qū)和C33區(qū)后，抗體出現(xiàn)早，有助早期診斷，提高陽(yáng)性率。有利早期診斷。