士鋒動(dòng)物肝臟中DNA的制備

【資料簡(jiǎn)介】

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?br />學(xué)習(xí)并掌握動(dòng)物組織總dna的提取方法及其原理。

二、實(shí)驗(yàn)原理:
要獲得純的DNA樣品，必須考慮以下幾點(diǎn)：
??如何選材，如何破碎組織細(xì)胞？
??如何除去蛋白質(zhì)？在真核細(xì)胞內(nèi)，DNA與蛋白質(zhì)結(jié)合成核蛋白的形式存在。因此，分離DNA時(shí)必須使其與蛋白質(zhì)解離，并除去蛋白質(zhì)。
??設(shè)法除去RNA的污染；
??防止dna酶的降解作用；

(一)選材
要提取動(dòng)物組織DNA，一般選擇細(xì)胞膜較脆弱，容易破碎的動(dòng)物臟器，如胸腺、肝臟、脾臟、胰臟、精子等。

(二)細(xì)胞破碎方法—機(jī)械物理法：
•研磨：將剪碎的動(dòng)物組織置于研缽或勻漿器中，加入少量石英砂研磨或勻漿，破碎細(xì)胞。這種方法溫和，適合實(shí)驗(yàn)室使用。
•組織搗碎器：較劇烈的破碎細(xì)胞的方法，為了防止發(fā)熱和升溫過(guò)高，通常是轉(zhuǎn)10秒—20秒，停10秒—20秒，可反復(fù)多次。
•壓榨法：在1000×105Pa—2000×105Pa 的高壓下使幾十毫升的細(xì)胞懸液通過(guò)一個(gè)小孔突然釋放至常壓，細(xì)胞將*破碎。溫和的、*破碎細(xì)胞的方法，但儀器費(fèi)用較高。(少量細(xì)少量細(xì)胞可用French press,大量可用Manto-gaulin
•反復(fù)凍融法：將待破碎的細(xì)胞冷至－15℃到－20℃，然后放于室溫(或40℃)迅速融化，由于細(xì)胞內(nèi)形成冰粒使剩余胞液的鹽濃度增高而引起細(xì)胞溶脹破碎。
•超聲波處理法：借助超聲波的振動(dòng)力破碎細(xì)胞壁和細(xì)胞器。使用時(shí)注意降溫，防止過(guò)熱。
•冷熱交替法：在90℃左右維持?jǐn)?shù)分鐘，立即放入冰浴中使之冷卻，如此反復(fù)多次，絕大部分細(xì)胞可以被破碎。
組織搗碎勻漿機(jī)