豚鼠腫瘤壞死因子α（TNF-α）酶聯(lián)免疫（Elisa）

【資料簡介】

豚鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)酶聯(lián)免疫（Elisa）試劑盒說明書本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍： 96T
20 pmol/L -500 pmol/L
使用目的：
本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中水平。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入核因子，再與結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的核呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中濃度。
豚鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)酶聯(lián)免疫（Elisa）試劑盒說明書試劑盒組成
 30 倍濃縮洗滌液 20ml× 瓶 7 終止液 6ml× 瓶
2 酶標試劑 6ml× 瓶 8 標準品（960 pmol/L） 0.5ml× 瓶
3 酶標包被板 2 孔×8 條 9 標準品稀釋液 .5ml× 瓶
4 樣品稀釋液 6ml× 瓶 0 說明書  份
5 顯色劑 A 液 6ml× 瓶  封板膜 2 張
6 顯色劑 B 液 6ml×/瓶 2 密封袋  個
標本要求
．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
480 pmol/L 5 號標準品 50µl 的原倍標準品加入 50µl 標準品稀釋液
240 pmol/L 4 號標準品 50µl 的 5 號標準品加入 50µl 標準品稀釋液
20 pmol/L 3 號標準品 50µl 的 4 號標準品加入 50µl 標準品稀釋液
60 pmol/L 2 號標準品 50µl 的 3 號標準品加入 50µl 標準品稀釋液
30 pmol/L  號標準品 50µl 的 2 號標準品加入 50µl 標準品稀釋液
2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，然后再加待測樣品 0µl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復(fù) 5 次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。
7.溫育：操作同 3。
8.洗滌：操作同 5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色5 分鐘.
0.終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
.測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止液后 5 分鐘以內(nèi)進行。
豚鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)酶聯(lián)免疫（Elisa）試劑盒說明書操作程序總結(jié)：

豚鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)酶聯(lián)免疫（Elisa）試劑盒說明書計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD  值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD 值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與 OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
注意事項
．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 5-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在 5 分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本 OD 值大于標準品孔*孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
保存條件及有效期
．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 個月