瓊脂糖凝膠4B sapharose 4B 使用說明介紹

【資料簡(jiǎn)介】

點(diǎn)擊次數(shù)：18 發(fā)布時(shí)間：2010-11-24 20:46:10

 

瓊脂糖凝膠4B產(chǎn)品說明書

瓊脂糖凝膠4B是用4%濃度瓊脂糖制備成的球型顆粒，作為凝膠層析介質(zhì)使用。

1. 外觀

本品為乳白色球狀凝膠,無嗅、無味、無肉眼可見雜質(zhì)。

2. 理化指標(biāo)

項(xiàng)       目	指       標(biāo)
基質(zhì)	4%瓊脂糖凝膠
排阻極限	60000~20×106 （球蛋白）
形狀	球型
粒徑	45~165 μm
zui高流速	70-140 cm/h*
耐壓	0.03 MPa
耐熱	pH7水中45℃24h
pH適用范圍	4~9 （長(zhǎng)時(shí)間）, 3~11（短時(shí)間，在位清洗）
化學(xué)穩(wěn)定性	可耐8mol/L尿素、6mol/L鹽酸胍

 *檢測(cè)條件： 層析柱10mm×300mm  *柱床高15cm,25℃, 流動(dòng)相為0.1mol/LNaCl

3. 包裝

產(chǎn)品以聚胺酯瓶密封包裝，外貼標(biāo)簽，注明“品名、體積、顆粒大小、” 等內(nèi)容。

4. 貯存

產(chǎn)品應(yīng)密封貯存在4℃~25℃（保存溶液為20% 乙醇），通風(fēng)、干燥、清潔的地方。不能冷凍。

用過的柱子貯存在4℃（20% 乙醇）。

5. 注意事項(xiàng)

本品應(yīng)避免與氧化劑接觸，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露在空氣中

6.運(yùn)輸

運(yùn)輸中應(yīng)避免日曬、雨淋、重壓，嚴(yán)禁與有毒、有害物品混運(yùn)。

7.保質(zhì)期

5年。

8.應(yīng)用

本產(chǎn)品為傳統(tǒng)的瓊脂糖介質(zhì)，非特異性吸附低，回收率高，可多次重復(fù)使用等特點(diǎn)，用于分子量差異大、對(duì)分辨率要求不高的樣品的凝膠層析純化。下面簡(jiǎn)要介紹介質(zhì)的使用過程。

8.1 裝柱

凝膠過濾介質(zhì)的使用對(duì)裝柱的要求較高，為了保證分離效果，一般通過柱子上加一個(gè)裝柱器來使分離柱裝滿凝膠，或采用帶有軸向加壓裝置的柱子。凝膠柱床一般高于60cm。裝柱效果可用染料或丙酮-水溶液進(jìn)行檢驗(yàn)。

以下過程為通用介質(zhì)裝填過程。若為帶有軸向加壓裝置的柱子，可在柱床穩(wěn)定后將柱床壓緊，接好管路。

⑴讓所有的材料和試劑達(dá)到室溫。配制緩沖液。凝膠層析上樣、平衡和洗脫只用一種低鹽濃度的緩沖液。

 ⑵選擇一根一定直徑的柱子，長(zhǎng)約30~60cm,根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠（約為柱床體積的1.15倍），清洗掉20%乙醇，抽干，用緩沖液（按凝膠：緩沖液=3：1的比例）配成勻漿。勻漿作脫氣處理。不要?jiǎng)×覕噭?dòng)，以免攪壞微球。

⑶將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一小段液位（液面略高于濾膜），務(wù)必使底端無氣泡。

⑷  用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。

⑸ 打開蠕動(dòng)泵，讓緩沖液緩慢流過，使柱床穩(wěn)定。

⑹用一個(gè)裝柱器輔助裝柱。裝完后柱床上端輕輕刮平，上好柱頭。

8.2平衡

讓緩沖液以一定流速流過柱子，到流出液電導(dǎo)和pH不變。

8.3上樣

⑴樣品用緩沖液配制，渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。含鹽量過大、濃度過小的樣品要先做處理，再上樣。

⑵介質(zhì)對(duì)樣品組分的分離是按組分分子量大小進(jìn)行的，分子量大的先流出來。

⑶上樣體積約為柱體積的1~2%，越小分離越好。

8.4洗脫

用緩沖液洗脫，洗脫中保持流速、緩沖液組成不變。

8.5再生

一般用緩沖液洗到平衡，可再次使用。

8.6注意：在裝柱、使用和保存柱子的時(shí)候，始終要避免柱子流干氣泡進(jìn)入。

 

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