大鼠腫瘤壞死因子α（TNF-α）酶聯(lián)免疫檢測
試劑盒使用說明書
使用前仔細(xì)閱讀本說明書。本酶聯(lián)免疫試劑盒是基于雙抗體夾心技術(shù)原理，來檢測大鼠腫
瘤壞死因子α（TNF-α），只能用于研究用途，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。
用途：用于大鼠血清、血漿、組織及相關(guān)液體樣本中腫瘤壞死因子α（TNF-α）的測定。
工作原理
本試劑盒采用的是雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定樣品中大鼠腫瘤壞死因
子α（TNF-α）的水平。向預(yù)先包被大鼠腫瘤壞死因子α（TNF-α）抗體的酶標(biāo)孔中加入腫
瘤壞死因子α（TNF-α），溫育；洗滌后，加入HRP 標(biāo)記的腫瘤壞死因子α（TNF-α）抗體。
再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶，然后加入底物A、B，產(chǎn)生藍(lán)色，并在酸的作用下
轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺與樣品中大鼠腫瘤壞死因子α（TNF-α）的濃度呈正相關(guān)。
試劑盒組成
1 標(biāo)準(zhǔn)品0.3ml*6 管7 顯色劑B 液6ml
2 酶標(biāo)包被板12 孔×8 條8 終止液6ml
3 酶標(biāo)試劑6ml 9 說明書1 份
4 20 倍濃縮洗滌液25ml 10 封板膜2 張
5 樣品稀釋液6ml 11 密封袋1 個(gè)
6 顯色劑A 液6ml
注：標(biāo)準(zhǔn)品（S1-S6）的濃度依次為：0、10、20、40、80、160 pg/mL
需要而未提供的試劑和器材
1． 37℃恒溫箱。
2． 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。
3． 精密移液器及一次性吸頭
4． 蒸餾水，
5． 一次性試管
6． 吸水紙
注意事項(xiàng)
1． 從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30 分鐘。酶標(biāo)包被板開封
后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2． 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差
3． 建議所有標(biāo)準(zhǔn)品、樣本都做雙份檢測。
4． 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
5． 為避免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。
6． 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
7． 底物B 對光敏感，避免長時(shí)間暴露于光下。
洗板方法
手工洗板方法：甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾
次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml 注入孔內(nèi)，浸泡1-2 分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。
自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中
標(biāo)本要求
1．不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
2．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
操作程序
1． 分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待
測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl；在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔
中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5 倍）。每孔加
入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。輕輕晃動(dòng)混勻，37℃溫育60 分鐘。
2． 棄去液體，甩干，每孔加滿稀釋后洗滌液，振蕩30 秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。
如此重復(fù)5 次，拍干。
3． 每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 分
鐘.
4． 取出酶標(biāo)板，每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
5． 測定：以空白孔調(diào)零，在450nm 波長下測量各孔的吸光度值（OD 值）。測定應(yīng)在加
終止液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
6． 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD 值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD
值在回歸方程上計(jì)算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計(jì)算。應(yīng)記住由
于樣品稀釋了的，其實(shí)際濃度應(yīng)該乘以總稀釋倍數(shù)。
操作程序總結(jié)：
準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品
加入準(zhǔn)備好的樣品、標(biāo)準(zhǔn)品和酶標(biāo)試劑，37℃反應(yīng)60分鐘
洗板5次，加入顯色液A、B，37℃顯色15分鐘
加入終止液
15分鐘之內(nèi)讀OD值
計(jì)算
檢測范圍：5pg/mL→160pg/mL。
規(guī)格： 96T/盒
保存： 2-8℃
有效期： 6 個(gè)月（2-8℃）。

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