小鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP-5b）ELISA試劑盒其他指標：SHG-44（膠質(zhì)瘤）  可溶性CD38（sCD38） 5核苷酸酶（5-NT）
Caco-2（結腸腺癌）  可溶性CD21（CR2/sCD21） 1,3-βD葡葡糖苷酶（1,3-βD-Glu）
Caco-2（結腸腺癌）  可溶性瘦素受體（sLR） 肌酸激酶（CK）
U251（膠質(zhì)瘤）  Toll樣受體9（TLR-9/CD289） 靶向核糖核酸酶（TR）
LS 174T（結腸腺癌）  轉(zhuǎn)化生長因子β2（TGFβ2） 蛋白激酶C（PKC）
SK-N-MC（神經(jīng)上皮瘤）  單核趨化蛋白4（MCP-4/CCL13） 醛縮酶（ALD）
SK-N-MC（神經(jīng)上皮瘤）  白三烯D4（LTD4） L-乳酸脫氫酶（L-LDH）
BxPC-3（原位胰腺腺癌）  N鈣黏蛋白/神經(jīng)鈣黏蛋白（N-Cad） 酸性神經(jīng)鞘磷脂酶（ASM）
BxPC-3（原位胰腺腺癌）  肝素結合性表皮生長因子（HB-EGF） 花生四烯酸5脂加氧酶（ALOX-5）
KP-N-NS（腎上腺神經(jīng)母瘤（腦轉(zhuǎn)移））  紅刺激因子（ESF） 5脂加氧酶（5-LO/LOX）小鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP-5b）ELISA試劑盒 操作步驟

方法一　雙抗體夾心法

　　　1.　包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。

　　　2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。

　　　3.　加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。

　　　4.　加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

　　　5.　終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。

　　　6.　結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

方法二　間接法

　　　1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜；

　　　2.次日洗滌3次；

　　　3.加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌；

　　　4.（同時做空白、陰性及陽性孔對照）于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體（抗抗體）0.1ml；

　　　5.37℃孵育30-60分鐘，洗滌；

　　　6.’zui后一遍用DDW洗滌。

　　　其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。

試劑器材

試劑

　　?。?font face="Times New Roman">1）　包被緩沖液（PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液）:

　　　Na2CO3 1.59克

　　　NaHCO3　 2.93克

　　　加蒸餾水至1000ml

　　　（2）　洗滌緩沖液（PH7.4PBS）：0.15M

　　　KH2PO4 　0.2克

　　　Na2HPO4·12H2O　2.9克

　　　NaCl　8.0克

　　　KCl　0.2克

　　　Tween-20　0.05%　0.5ml

　　　加蒸餾水至1000ml

　　　（3）　稀釋液：

　　　牛血清白蛋白（BSA） 0.1克

　　　加洗滌緩沖液至100ml

　　　或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10%使用。

　　?。?font face="Times New Roman">4）　終止液（2M　H2SO4）：

　　　蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸（98%）21.7ml。

　　　（5）　底物緩沖液（PH5.0磷酸棗檸檬酸）:

　　　0.2MNa2HPO4（28.4克/L）25.7ml

　　　0.1M檸檬酸（19.2克/L）　 24.3ml

　　　加蒸餾水50ml。

　　?。?font face="Times New Roman">6）　TMB（四甲基聯(lián)苯胺）使用液:

　　　TMB（10mg/5ml無水乙醇）0.5ml

　　　底物緩沖液（PH5.5）　 10ml

　　　0.75%H2O2　 　32μl

　　?。?font face="Times New Roman">7）　ABTS使用液:

　　　ABTS　0.5mg

Elisa試驗是一種敏感性高，特異性強，重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡便，結果判斷較客觀等因素，已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。ELISA檢測試劑盒是用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎（HEV）病毒 IgM 抗體ELISA檢測。