BT549乳腺管癌細胞 上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)BT549乳腺管癌細胞:
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產品:
1,3-BIS-(2,6-DIISOPROPYLPHENYL)-IMIDAZOLIUM TETRAFLUOROBORATE 1,3-雙(2,6-二異丙基苯基)咪唑四氟硼酸鹽 286014-25-3
1,3-DiMethoxypropane 1,3-二甲氧基丙烷 17081-21-9
英文名稱 中文名稱 CAS號
1-(broMoMethyl)cyclohexene 1-溴甲基環(huán)已烯 37677-17-1
1-(CARBOXYMETHYL)PYRIDINIUMCHLORIDE 6266-23-5
1-(DiphenylMethyl)-3-hydroxyazetidine N-二苯甲基氮雜環(huán)丁烷-3-醇 18621-17-5
1-(DiphenylMethyl)-4-[(1RS,3E)-4-phenyl-1-[(E)-2-phenylethenyl)-3-buten-1-yl]piperazine 1199751-98-8
2-Propanone, 1-(ethenylthio)- (9ci) 81715-51-7
1-(Naphthalen-2-yl)-2-(pyrrolidin-1-yl)pentan-1-one hydrochloride 1-(2-萘基)-2-(1-吡咯烷基)-1-戊酮 850352-11-3
1-(PHENYL) 2-NITROETHANE Β-硝基苯乙烷 6125-24-2
1-(tert-Butoxycarbonyl)-3,3-diMethyl-4-oxopiperidine 1-BOC-3,3-二甲基-4-氧代哌啶 324769-06-4
1, 1, 1- Trifluoroacetone 1,1,1-三氟丙酮 421-50-1
1, 1-Bis(4-hydroxyphenyl)cyclohexane ;Bisphenol Z 1,1'-雙(4-羥基苯基)環(huán)己烷 843-55-0
1,3-prpanediol 1,3-丙二醇 504-63-2
1,4-Dioxan-2-One 1,4-二氧六環(huán)-2-酮 3041-16-5
1,1,1-Trifluoro-2-trifluoroMethyl-2,4-pentanediol 1,1,1-三氟-2-三氟甲基-2,4-戊二醇 34844-48-9
1,1,1-TRIFLUORO-3-PHENYLPROPAN-2-OL 1,1,1-三氟-3-苯基-2-丙醇 330-72-3
1,1,1-TRIFLUORONITROETHANE 2,2,2-三氟硝基乙烷 819-07-8
1,1,1-triphenylpropan -2-one 795-36-8
1,1,1-Tris(aMinoMethyl)ethane trihydrochloride, Ethylidintris(MethylaMine) trihydrochloride 2-(氨甲基)-2-甲基-1,3-丙二胺 三鹽酸鹽 31044-82-3
Cyclopentane,1,1,2,2,3,3,4-heptafluoro 1,1,2,2,3,3,4-七氟環(huán)戊烷 15290-77-4
3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,9,9,10,10,11,11,12,12,13,13,14,14,14-pentacosafluorotetradecan-1-ol 1,1,2,2-四氫全氟十四醇 39239-77-5
1,1,2-ETHANETRICARBOXYLIC ACID 922-84-9
1,1,2-Trichloroethane 1,1,2-三氯乙烷 79-00-5
1,1,2-Trichlorotrifluoroethane 1,1,2-三氟三氯乙烷 76-13-1
1,1',3,3,3',3'-HEXAMETHYLINDODICARBOCYANINE IODIDE 1,1',3,3,3',3'-六甲基吲哚雙碳菁碘 36536-22-8
1,1,3-TRIMETHYLCYCLOHEXANE 1,1,3-*基環(huán)己烷 3073-66-3
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內.
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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