L6565小鼠L6565白血病克隆細(xì)胞系 上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級(jí)胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級(jí)胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)L6565小鼠L6565白血病克隆細(xì)胞系:
(1) 收集1×106個(gè)細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測(cè)即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個(gè)細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測(cè)。
(7)流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測(cè)樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時(shí)。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
(4-CHLORO-PHENYL)-ACETALDEHYDE 對(duì)氯苯乙醛 4251-65-4
(5S, 6R) 5, 6-diphenyl-2-Morpholinone (5S,6R)-5,6-二苯基嗎啉-2-酮 144538-22-7
Methyl 2,3-O-isopropylidene-D-glycerate (R)-(+)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊環(huán)-4-羧酸甲酯 52373-72-5
(R)-(+)-2-Methyl-2-propanesulfinaMide (R)-(+)-叔丁基亞磺酰胺 196929-78-9
RoMidepsin; Istodax 羅米地辛 128517-07-7
(-)-DIP-Chloride (-)-二異松蒎基氯硼烷 85116-37-6
(-)-DI-TERT-BUTYL D-TARTRATE 117384-46-0
(-)-ECG-3''-O-ME 83104-86-3
(-)-EGC-4'-O-ME 17291-05-3
(+)-DIHYDROCARVONE 2-甲基-5-(1-甲基乙烯基)環(huán)己酮 7764-50-3
(+)-DiisopinocaMpheylborane (+)-二異松蒎烯基硼烷 21947-87-5
(+-)Epichlorohydrin-epoxy-d3 1202050-51-8
(+)-GALLOCATECHIN GALLOCATECHIN 970-73-0
(+)-GaMMa-Gurjunene 22567-17-5
(S)-Alpine-BoraMine (S)-異松蒎基硼烷四甲基乙二胺絡(luò)合物 68297-74-5
S-KetaMine.HCl 克他命 33643-47-9
(+)-MAGNOFLORINE IODIDE 木蘭花鹼 2141/9/5
(+)-PINANEBORANE (+)-蒎烷硼烷 90084-43-8
(+)-Pinoresinol PINORESINOL 487-36-5
(+)-p-Menth-2-ene-1, 8-diol 20053-40-1
(+)-SABINENE, TERPENE STANDARD 水合檜烯,萜烯(標(biāo)準(zhǔn)品) 2009-00-9
WIN 55212-2 Mesylate (R)-(+)-WIN 55,212-2 甲磺酸鹽 131543-23-2
(+/-) 1-(4-BROMO-2 5-DIMETHOXYPHENYL)-2 4-溴-2,5二甲氧基* 66142-81-2
(+/-)-1PHENYL-3-AZABICYCLO [3.1.0]HEXANE 67644-21-7
(+/-)-2-(6-METHOXY-2-NAPHTHYL)PROPIONIC ACID 2-(6-甲氧基-2-萘基)丙酸 23981-80-8
(+/-)-2-AMINO-4-BROMOBUTANOIC ACID HBR 76338-90-4
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來(lái),移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過(guò)夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時(shí)間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時(shí)。不能超過(guò)1小時(shí)。zui后放入-80度冰箱過(guò)夜。第二天放入液氮中。
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