F9畸胎瘤細胞 上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)F9畸胎瘤細胞:
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產品:
(+/-)-ANABASINE 新煙堿 40774-73-0
(+/-)-BAY K 8644 1,4-二氫-2,6-二甲基-5-硝基-4-(2-[三氟甲基]苯基)吡啶-3-羧酸甲酯 71145-03-4
(+/-)-BLEBBISTATIN (+/-)-BLEBBISTATIN 674289-55-5
(+/-)-EPINEPHRINE SULFONIC ACID 26405-77-6
rac-Lavandulol 5-甲基-2-(1-甲乙烯基)-4-己烯-1-醇 58461-27-1
(±)-11-HYDROXY-d9-THC 36557-05-8
(±)-Scoulerine 6451-72-5
(1-(8-BroMobenzo[1,2-b;4,5-b]difuran-4-yl)-2-aMinopropane 502759-67-3
(1,2-DIMETHYLPROPYL)BENZENE 1,2-二甲基丙基苯 4481-30-5
(2R,5R)-2-Methyl-5-propan-2-ylbicyclo[3.1.0]hexan-2-ol 17699-16-0
(1-DIAZO-2-OXO-PROPYL)-PHOSPHONIC ACID DIMETHYL ESTER (1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯 90965-06-3
(1E,3Z)-1,4-dichlorobuta-1,3-diene 3588-13-4
(1H-INDOL-3-YL)METHANAMINE 吲哚-3-甲胺 22259-53-6
(1-Mercaptoundec-11-yl)hexa(ethylene glycol) 130727-44-5
(1-Methylcyclohexyl)MethanaMine 3913-98-2
(1R)-(-)-(10-CaMphorsulfonyl)oxaziridine (1R)-(-)-10-樟腦磺啞嗪 104372-31-8
(1R,2R,3S,5R)-(-)-2,3-Pinanediol (1R,2R,3S,5R)-(-)-2,3-蒎烷二醇 22422-34-0
(1R,2S)-FMOC-2-AMINOCYCLOHEXANE CARBOXYLIC ACID 312965-06-3
(1R,2S)-N-BOC-1-AMINO-2-PHENYLCYCLOPROPANECARBOXYLIC ACID 244205-60-5
trans-3-AMinoCyclopentanol hydroChloride 反式-3-氨基環(huán)戊醇鹽酸鹽 124555-33-5
(1'R,3'S,3S,5R,6R)-5-AMINO-2-AMINOMETHYL-6-(4,6-DIAMINO-2,3-DIHYDROXY-CYCLOHEXYLOXY)-TETRAHYDRO-PYRAN-3,4-DIOL 新霉胺 3947-65-7
(1R,3S,4S)-N-Boc-2-azabicyclo[2.2.1]heptane-3-carboxylic acid (1R,3S,4S)-N-叔丁氧羰基-2-氮雜雙環(huán)[2.2.1]庚烷-3-羧酸 291775-59-2
(1R,3S,5R)-2-Azabicyclo[3.3.0]octane-3-carboxylic Acid 87679-21-8
ethyl (3R,4R,5R)-4,5-iMino-3-(1-ethylpropoxy)-1-cyclohexene-1-carboxylate (1R,5R,6R)-5-(1-乙丙基)-7-氮雜雙環(huán)[4.1.0]庚-3-烯-3-羧酸乙酯 204255-02-7
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現用現配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內.
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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