LLC Lewis肺癌細胞上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)LLC Lewis肺癌細胞 :
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。 加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產品:
(1S, 2R)-2-(BenzyloxyMethyl)-1-hydroxy-3-cyclopentene *中間體-7 110567-21-0
(1S,2R)-2-(tert-butoxycarbonylaMino)cyclopentanecarboxylic acid (1S,2R)-2-(BOC-氨基)環(huán)戊烷甲酸 137170-89-9
(1S,2R,3S,5R)-2-(BenzyloxyMethyl)-6-oxabicyclo[3.1.0]hexan-3-ol (1S,2R,3S,5R)-2-[(芐氧甲基)-6-氧雜二環(huán)[3.1.0]己-3-醇 117641-39-1
(1S,2R,3S,5R)-3-(PhenylMethoxy)-2-[(phenylMethoxy)Methyl]-6-oxabicyclo[3.1.0]hexane (1S,2R,3S,5R)-3-(芐氧甲基)-6-氧雜二環(huán)[3.1.0]己烷 110567-22-1
(1S,2S)-(+)-2-AMi-phenyl-1,3-propanediol (1S,2S)-(+)-2-氨基-1-苯基-1,3-丙二醇 28143-91-1
英文名稱 中文名稱 CAS號
Magnesium stearate * 557-04-0
MALONDIALDEHYDE 1-[5-(2-羥基乙基)硫代]-4-硝基-2-噻吩]乙基-1-酮 5578-67-6
decahydro-2-hydroxy-2,5,5,8a-tetramethylnaphthalene-1-ethanol 香紫蘇二醇 55881-96-4
5-METHYL-2,2'-BIPYRIDYL 5-甲基-2,2'-聯吡啶 56100-20-0
BROMONITROMETHANE 溴代硝基甲烷 563-70-2
Iron(II) carbonate 碳酸亞鐵(1:1) 563-71-3
2-OXOETHANOIC ACID 乙醛酸水合物 563-96-2
AKOS BB-9698 5,6-二氫環(huán)戊并[B]噻吩-4-酮 5650-51-1
7-Keto DHEA 7-酮基去氫表雄酮 566-19-8
2,2-DIMETHYL-BUT-3-YNOIC ACID 2,2-二甲基-丁-3-炔酸 56663-76-4
CATIONIC STARCH 2-羥基-3-(*基氨根)丙基醚淀粉氯化物 56780-58-6
ethyl L-isoleucinate hydrochloride L-異*乙酯鹽酸鹽 56782-52-6
PolyhexaMethyleneguanidine hydrochloride 聚六亞甲基胍鹽酸鹽 57028-96-3
Tetraphenyl resorcinol bis(diphenylphosphate) *四苯基二磷酸酯 57583-54-7
Sulfamethazine * 57-68-1
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現用現配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內.
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
暫無信息 |