T/G HA-VSMC人主動脈血管平滑肌細胞上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)T/G HA-VSMC人主動脈血管平滑肌細胞:
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產品:
N-BOC-HEXAHYDRO-5-OXOCYCLOPENTA[C]PYRROLE N-BOC-六氫-5-氧代環(huán)戊[C]并吡咯 148404-28-8
N-Boc-N,N-bis(2-chloroethyl)aMine N,N-雙(2-氯乙基)氨基甲酸叔丁酯 118753-70-1
N-Boc-trans-4-aMino-L-proline Methyl ester hydrochloride N-Boc-反式-4-氨基-L-*甲酯鹽酸鹽 334999-32-5
n-Butyl Methanesulfonate 1912-32-9
N-BUTYRYL-DL-HOMOCYSTEINE THIOLACTONE N-(四氫-2-氧代-3-噻吩基)丁酰胺 39837-08-6
N-Cbz-1,2,5,6-tetrahydropyridine N-苯甲氧基甲?;?1,2,5,6-四氫吡啶 66207-23-6
N-CBZ-4-PIPERIDINEACETIC ACID 1-CBZ-4-哌啶乙酸 63845-28-3
N-CBZ-4-PIPERIDINEPROPIONIC ACID 1-CBZ-4-哌啶丙酸 63845-33-0
N-CBZ-Glycyl-L-proline 4-nitroanilide Z-GLY-PRO-PNA 65022-15-3
N-Deboc-Docetaxel N-DEBOC-DOCETAXEL 133524-69-3
N-DEMETHYL ERYTHROMYCIN A 992-62-1
N-dodecylpropane-1,3-diaMine N-十二烷基-1,3-丙二胺 5538-95-4
Necrostatin-1 4311-88-0
Necrostatin-5 337349-54-9
NedocroMil 尼多克羅 69049-73-6
NedocroMil sodiuM 奈多羅米鈉 69049-74-7
Nelfinavir 甲磺酸萘非那韋 159989-64-7
Nelfinavir Mesylate 甲磺酸奈非那韋 159989-65-8
neophytadiene 新植二烯 504-96-1
NEORUSCOGENIN 新魯斯可皂苷元 17676-33-4
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內.
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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