RBL-2H3白血病細胞 上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)RBL-2H3白血病細胞 :
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞 ,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
Isobutyl stearate 硬脂酸異丁酯 646-13-9
Isobutylboronic acid 異丁基硼酸 84110-40-7
Isobutyrylglycine 異丁酰基* 15926-18-8
Isochlorogenic acid B 3,4-二咖啡酰奎寧酸 14534-61-3
Isocitric acid trisodiuM salt 異檸檬酸三鈉鹽 1637-73-6
ISOCORYDINE HYDROCHLORIDE 異紫堇定堿 475-67-2
isodecyl alcohol 異癸醇 25339-17-7
Isodecyl pelargonate 17671-25-9
Isoflurane 異氟醚 26675-46-7
ISOGUANOSINE HYDRATE 359436-55-8
ISOHEPTANE 異辛烷 31394-54-4
IsoiMperatorin 異歐前胡素 482-45-1
ISONONANOIC ACID 異壬酸 693-19-6
ISONONYLPHENOL-ETHOXYLATE 4-壬基酚乙氧基化物 37205-87-1
Isooctyl Stearate 40550-16-1
Isopentenyl pyrophosphate triaMMoniuM salt solution 116057-53-5
isopropenyl chloroforMate 異丙烯基氯甲酸酯 57933-83-2
Isopropyl Analog 89848-49-7
isopropyl dihydrogen phosphate 1623-24-1
Isopropyl ether 異丙醚 108-20-3
Isopropylphenyl phosphate 異丙基化磷酸三苯酯 68937-41-7
quercetin-3-glucoside 槲皮素-3-氧葡萄糖甙 21637-25-2
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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