NCI-H292肺癌細(xì)胞淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)NCI-H292肺癌細(xì)胞淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移:
(1) 收集1×106個細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測。
(7)流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
HESPERETIN DIHYDROCHALCONE 35400-60-3
Heudelotinone HEUDELOTINONE 133453-58-4
HexabroMocyclododecane 六溴環(huán)十二烷 25637-99-4
HexabroMostearic acid 六溴硬脂酸 4167/8/2
Hexachlorodisilane 六氯乙硅烷 13465-77-5
POTASSIUM CHROMIC CYANIDE 六氰酸鉻鉀 13601-11-1
Hexadecafluoroheptane 全氟庚烷 335-57-9
hexadecanal 十六醛 629-80-1
Hexadecyl acrylate 丙烯酸十六酯 13402-02-3
HEXADECYL[2-([P-METHOXYBENZYL]-2-PYRIMIDINYLAMINO)ETHYL]DIMETHYL-AMMONIUM BROMIDE 嘧苯十六銨 553-08-2
Hexaethylene glycol diMethyl ether 六乙二醇二甲醚 1072-40-8
HEXAFLUORO-2-BUTYNE 六氟-2-丁炔 692-50-2
Hexafluorozirconic acid 六氟鋯酸 12021-95-3
Hexahydro-1-(4-piperidinyl)-5H-1,4-diazepin-5-on 4-[1-(5-氧代-1,4-二氮雜環(huán)庚烷基)]哌啶 344779-09-5
HEXAHYDRO-1,3,5-TRINITRO-1,3,5-TRIAZINE 黑索今(環(huán)三亞甲基三硝胺) 121-82-4
hexaMethoxyphosphazine 957-13-1
HexaMethyldisilazane 六甲基二硅氮烷 999-97-3
HexaMethyldisiloxane 六甲基二硅氧烷 107-46-0
HexaMethylenetetraMine * 100-97-0
Hexanal, 2-Methyl- 925-54-2
HEXANAL,6-HYDROXY- 34067-76-0
THEOLEUCINE 137041-31-7
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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