【中文名稱】:小鼠*轉(zhuǎn)氨酶/谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT/GPT)ELISA 試劑盒
【英文名稱】:Mouse AlanineAminotransferase,ALT/GPT ELISA Kit
【產(chǎn)品規(guī)格】:96T/48T
【保存條件】:2-8℃低溫保存
【保質(zhì)期】:6個月,所有試劑盒均提供批次。
【試劑盒成分】:酶標板,試劑,標準品等。
檢測范圍:人、綿羊、小鼠、大鼠、豬、兔、山羊、牛、馬、豬、其它動物細胞因子、植物細胞因子、骨代謝、細胞凋亡、激素內(nèi)分泌、活性多肽、肝纖維化、自身抗體、血栓與止血、腫瘤、自身抗體科研Elisa檢測試劑盒。
用于科研方面,不用于臨床診斷
ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。此項技術(shù)自70年代初問世以來,發(fā)展十分迅速,目前已被廣泛用于生物學和醫(yī)學科學的許多領(lǐng)域。
原理
ELISA是以免疫學反應為基礎,將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。由于抗原、抗體的反應在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行,每加入一種試劑孵育后,可通過洗滌除去多余的游離反應物,從而保證試驗結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。在實際應用中,通過不同的設計,具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測抗體的間接法(圖a)、用于檢測抗原的雙抗體夾心法(圖b)以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法。
小鼠*轉(zhuǎn)氨酶/谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT/GPT)ELISA 試劑盒操作步驟
1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在*、第二孔中分別加標準品100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為1200pg/ml,800pg/ml ,400pg/ml,200pg/ml,100pg/ml)。
2.加樣:分別設空白孔(空白比照孔不加樣品及酶標試劑,其他各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不涉及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7.溫育:操作同3。
8.洗滌:操作同5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序丈量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
試驗原理
試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將*標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入和親素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關(guān)系。
自備材料
1. 蒸餾水。
2. 加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3. 振蕩器及磁力攪拌器等。
安全性
1. 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
2. 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
4. 試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
5. 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
6. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
7. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
8. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
9. 洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
10. 底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
11. 加入試劑的順序應*,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
12. 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
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