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DNA 分子在瓊脂糖凝膠中泳動(dòng)時(shí)有電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)。 DNA 分子在高于等電點(diǎn)的 pH 溶液中帶負(fù)電荷,在電場(chǎng)中向正極移動(dòng)。由于糖 - 磷酸骨架在結(jié)構(gòu)上的重復(fù)性質(zhì),相同數(shù)量的雙鏈 DNA 幾乎具有等量的凈電荷,因此它們能以同樣的速度向正極移動(dòng)。
制備瓊脂糖凝膠HP Fungal DNA Mini Kit (5)
1 .稱(chēng) 1. 2g 瓊脂糖,加 100ml 電泳緩沖液( 1×TAE )加熱熔化,取出搖勻,即為 1. 2% 的凝膠。
2. 當(dāng)膠液冷至 60℃ 時(shí),加 EB10μl ,小心混勻,緩慢倒入制膠模具中,在膠一端插上梳子。
3 .待膠凝固后,撥出梳子,將模具置于電泳槽中,加入 1×TAE ,讓液面高于膠面 2 -3mm 。
4 .取 4ul 質(zhì)粒,加 2ul lodaing buffer , 6ulddH 2 O ,混勻,用加樣器吸取樣品。加入點(diǎn)樣孔中,注意加樣器吸頭應(yīng)恰好置于凝膠點(diǎn)樣孔中,不可刺穿凝膠,也要防止將樣品溢出孔外。
5 .接通電源, 1-5V/cm 電壓,開(kāi)始電泳。HP Fungal DNA Mini Kit (5)
6 .當(dāng)溴酚蘭染料移動(dòng)到距離膠前沿 1 -50px 處,停止電泳。
7. 切斷電源后,取出凝膠,在紫外燈( 360nm 、 312nm 或 254nm )下或經(jīng)凝膠成像系統(tǒng)觀察或拍照。
堿裂解法提取質(zhì)粒是根據(jù)共價(jià)閉合環(huán)狀質(zhì)粒 DNA 與線性染色體 DNA 在拓?fù)鋵W(xué)上的差異來(lái)分離它們。在 pH 值介于 12. 0-12. 5 這個(gè)狹窄的范圍內(nèi),線性的 DNA 雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)而被變性,盡管在這樣的條件下,共價(jià)閉環(huán)質(zhì)粒 DNA 的氫鍵會(huì)被斷裂,但兩條互補(bǔ)鏈彼此相互盤(pán)繞,仍會(huì)緊密地結(jié)合在一起。當(dāng)加入 Ph4. 8 的乙酸鉀高鹽緩沖液恢復(fù) pH 至中性時(shí),共價(jià)閉合環(huán)狀的質(zhì)粒 DNA 的兩條互補(bǔ)鏈仍保持在一起,因此復(fù)性迅速而準(zhǔn)確,而線性的染色體 DNA 的兩條互補(bǔ)鏈彼此已*分開(kāi),復(fù)性就不會(huì)那么迅速而準(zhǔn)確,它們纏繞成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),通過(guò)離心,染色體 DNA 與不穩(wěn)定的大分子 RNA 、蛋白質(zhì) -SDS 復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。
HP Fungal DNA Mini Kit (5)相關(guān)產(chǎn)品系列表:
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xy-E10745 人鈣腔蛋白(CALU)ELISA試劑盒96t/48t Human calumenin,CALU ELISAkit
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xy-E10747 人維生素D結(jié)合蛋白(DBP)ELISA試劑盒96t/48t Human Vitamin D-binding protein,DBP ELISAkit
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xy-E10750 人鳥(niǎo)苷酸結(jié)合蛋白4(Gbp4)ELISA試劑盒96t/48t human guanylate nucleotide binding protein 4,Gbp4 ELISAkit
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xy-E10764 人preptin ELISA試劑盒96t/48t Human preptin ELISAkit
xy-E10765 人過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)ELISA試劑盒96t/48t Human peroxisome proliferators activator receptors
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