ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中的封閉液小知識(shí)
ELISA的試劑盒說(shuō)明上寫(xiě)封閉液用蔗糖溶液，一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封閉空白位點(diǎn)，蔗糖封閉的原理：
1、ELISA實(shí)驗(yàn)中，蔗糖本身沒(méi)有封閉作用;
2、封閉液一般是BSA、酪蛋白等或者是Tween等。
3、加蔗糖的主要目的是保護(hù)ELISA板子吸附(包被)的蛋白，起到“保護(hù)劑”的作用。
4、蔗糖溶液一般在ELISA板子經(jīng)過(guò)BSA封閉后加，當(dāng)然也有將蔗糖加到封閉液中同時(shí)進(jìn)行處理;那一種更好需要你實(shí)驗(yàn)后來(lái)驗(yàn)證。但多數(shù)選擇前者。
封閉劑還可用5%的脫脂乳(市售即可)，0.4%的明膠，但是實(shí)驗(yàn)表明前者比較好，后者不容易洗干凈未結(jié)合上的明膠。
封閉劑的原理就是與酶聯(lián)板上未結(jié)合抗原或抗體的微孔中用封閉劑封閉上，結(jié)合抗體或抗原的時(shí)候就不會(huì)產(chǎn)生非特異結(jié)合了，不會(huì)影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確度。
tween的作用：雖然不能單獨(dú)封閉，但和BSA在封閉時(shí)會(huì)起到清洗非特異性結(jié)合或結(jié)合不牢固的蛋白的作用，假如抗體包被在板上會(huì)出現(xiàn)YY-
附件：ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中緩沖溶液等試劑的配置
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值得一提的是有的封閉液中含有脫脂奶粉，不適合經(jīng)久保存。
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為了保證ELISA實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，實(shí)驗(yàn)操作中加入的緩沖液和各組分一定要，將洗滌液加入酶標(biāo)板中的時(shí)候防止加入的試劑混入另外一個(gè)酶標(biāo)孔，嚴(yán)防交叉污染。