(1)抗噬菌體菌株的選育

①高濃度噬菌體原液的制備選育抗噬菌體菌株需要相應(yīng)的專(zhuān)一性噬菌體作為選擇性因子，因此，選育抗噬菌體菌株，必須首先制備高濃度的噬菌體原液。而制備高濃度的噬菌體原液．首先要分離獲得噬菌體，并純化，然后制備高濃度的噬菌體原液。ELISA試劑盒

專(zhuān)一性噬菌體的獲得和純化：在培養(yǎng)皿上挑取被噬菌體感染后形成的噬菌斑，移接到吉有1％蛋白胨培養(yǎng)液中培養(yǎng)，然后用雙層瓊脂法進(jìn)行多次連續(xù)分離，直至出現(xiàn)的噬菌斑形狀大小基本一致。

價(jià)噬菌體原液的制備：將已純化的噬菌體接種到處于對(duì)數(shù)期的敏感菌培養(yǎng)液中，繼續(xù)培養(yǎng)10h左右，此時(shí)已有較多噬菌體釋放。將培養(yǎng)液離心，取含有噬菌體的上清液，再次接種到處于對(duì)數(shù)期的敏感菌培養(yǎng)液中，繼續(xù)培養(yǎng)后，用細(xì)菌濾器過(guò)濾，即得到價(jià)噬菌體原液。

噬菌體原液效價(jià)測(cè)定：效價(jià)指每毫升液體中含有噬菌體的數(shù)量，通常用“U/mL”表示。具體做法是用1％蛋白胨溶液作為稀釋劑，稀釋后用雙層瓊脂法進(jìn)行定量測(cè)定，計(jì)算公式如下：

效價(jià)=平均每皿噬菌斑數(shù)×稀釋倍數(shù)×取樣量折算ELISA試劑盒

②誘變與噬菌體抗性菌株的分離 單孢子懸浮液經(jīng)誘變后涂布在含有噬菌體的平板上篩選噬菌體抗性菌落。

③液體搖瓶振蕩培養(yǎng) 從含有噬菌體的平皿上篩選得到的抗性菌株，要進(jìn)一步進(jìn)行液體搖瓶振蕩培養(yǎng)。在搖瓶培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期時(shí)，加入一定量的價(jià)噬菌體原液．繼續(xù)培養(yǎng)，觀(guān)察菌體消失，而后又重新再生。此時(shí)將再生菌體移入新的培養(yǎng)基中，繼續(xù)培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期，加入價(jià)噬菌體原液，再培養(yǎng)。如此反復(fù)3～4次后，再將其分離到含噬菌體的平皿上，挑取單菌落移人斜面，并在斜面上滴加噬菌體原液，培養(yǎng)后觀(guān)察滴加噬菌體原液處的菌落生長(zhǎng)情況。選取生長(zhǎng)正常的菌體細(xì)胞，再進(jìn)行搖瓶復(fù)篩。經(jīng)觀(guān)察和測(cè)定，選取生長(zhǎng)正常、產(chǎn)物產(chǎn)量高的菌株，保存。

④進(jìn)一步考察抗性菌株對(duì)周?chē)h(huán)境中存在的各種噬菌體的抗性。

(2抗性菌株的特性研究

①抗性菌株穩(wěn)定性試驗(yàn)穩(wěn)定性是指已選育到的抗性菌株對(duì)噬菌體的抗性是否穩(wěn)定以及經(jīng)過(guò)傳代后的抗性菌株對(duì)噬菌體的抗性是否穩(wěn)定。選育到的抗性菌株要分別接種到含有高濃度噬菌體的斜面培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，然后采用雙層瓊脂法測(cè)定。如不出現(xiàn)噬菌斑，說(shuō)明抗性是穩(wěn)定的。對(duì)選育到的抗性菌株，還要進(jìn)行傳代試驗(yàn)，傳代后再用上述同樣方法測(cè)定其對(duì)噬菌體的抗性。

    在實(shí)際工作有時(shí)會(huì)把由溶源性引起的免疫性誤認(rèn)為是抗性。因此，要區(qū)分溶源性菌株與抗性菌株。常采用誘變因子誘導(dǎo)菌株的方法來(lái)區(qū)分，如是溶源性菌株，則可釋放噬菌體；如是抗性菌株，則不會(huì)出現(xiàn)這種現(xiàn)象。

②抗性菌株的產(chǎn)量性能抗噬菌體菌株，除對(duì)噬菌體的抗性要求外，其產(chǎn)量要求保持與敏感菌株相同或者更高。

    因?yàn)閷?duì)噬菌體的抗性是由基因突變引起的，所以抗噬菌體菌株在代謝過(guò)程中某些酶的活性也可能會(huì)有所改變．即抗性菌株的發(fā)酵特性可能會(huì)發(fā)生變化。因此，需要對(duì)抗噬菌體菌株的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化，使抗性菌株能發(fā)揮zui大的生產(chǎn)能力。ELISA試劑盒