ELSIA操作步驟復(fù)雜，影響反應(yīng)因素較多，P Elisa kit特別是固相載體的包被難達(dá)到各個(gè)體之間的*，因此在定量測(cè)定中，每批測(cè)試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)品在相同的條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。測(cè)定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA，標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍一般較寬，曲線zui高點(diǎn)的吸光度可接近2.0，繪制時(shí)常用半對(duì)數(shù)紙，以檢測(cè)物的濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，將各濃度的值逐點(diǎn)連接，所得曲線一般呈S形，其頭、尾部曲線趨于平坦，P Elisa kit中央較呈直線的部分是的檢測(cè)區(qū)域。

P Elisa kit技術(shù)操作要點(diǎn)：

1. 標(biāo)本的采取和保存。
2. 試劑的準(zhǔn)備
3. 加樣。
4. 保溫。
5. 洗滌。
6. 顯色和比色。
7. 酶標(biāo)比色儀。
8. 結(jié)果判斷。

將抗原或抗體固定在過程稱為包被(coating)。換言之，包被即是抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面的過程。P Elisa kit蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用于。這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響。載體對(duì)不同蛋白質(zhì)的吸附能力是不相同的，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán)，故更易吸附到固相載體表面。IgG對(duì)聚苯乙烯等固相具有較強(qiáng)的吸附力，其聯(lián)結(jié)多發(fā)生在Fc段上，抗體結(jié)合點(diǎn)暴露于外，因此抗體的包被一般均采用直接吸附法。蛋白質(zhì)抗原大多也可采用與抗體相似的方法包被。當(dāng)抗原決定簇存在于或鄰近于疏水區(qū)域時(shí)，抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充分暴露，在這種情況下，P Elisa kit直接包被效果不佳，可以采用間接的捕獲包被法，即先將針對(duì)該抗原的特異抗體作預(yù)包被，其后通過抗原抗體反應(yīng)使抗原固相化。此間接結(jié)合在固相上的抗原遠(yuǎn)離載體表面，其抗原決定簇也得以充分暴露。間接包被的抗原經(jīng)固相抗體的親和層析作用，包被在固相上的抗原純度大大提高，因此含雜質(zhì)較多的抗原也可采用捕獲包被法，試驗(yàn)的特異性、敏感性均由此得以改善，重復(fù)性亦佳。間接包被的另一優(yōu)點(diǎn)是抗原用量少，僅為直接包被的1/10乃至于/100。不易吸附在聚苯乙烯載體上的非蛋白質(zhì)抗原可采用特殊的包被方式。例如，在檢測(cè)抗DNA抗體時(shí)，需用DNA作為包被抗原，而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結(jié)合?？蓪⒕郾揭蚁┌逑冉?jīng)紫外線照射（例如30W紫外燈，75cm照射12小時(shí)），以增加其吸附性能。固相載體先用堿性蛋白質(zhì)，如聚賴氨酸、*等作預(yù)包被，也可提高核酸的結(jié)合力。也可用親和素*系統(tǒng)作間接包被，P Elisa kit即用親和素先包被載體，然后加入*化的DNA，這種包被方法均勻、牢固，已擴(kuò)大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測(cè)定。

脂類物質(zhì)無法與固相載體結(jié)合，可將其在有機(jī)溶劑（例如乙醇）中溶解后加入ELISA板孔中，開蓋置冰箱過夜或冷風(fēng)吹干，待酒精揮發(fā)后，讓脂質(zhì)自然干固在固相表面?？剐牧字贵w的ELISA試劑一般采用這種包被方式。

P Elisa kit相關(guān)產(chǎn)品*：xyA903Hu    人淋巴細(xì)胞功能關(guān)聯(lián)抗原3(LFA3)檢測(cè)試劑盒    ELISA Kit for Lymphocyte Function Associated Antigen 3 (LFA3)     檢測(cè)范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA897Hu    人血紅蛋白μ(HBμ)檢測(cè)試劑盒    ELISA Kit for Hemoglobin Mu (HBm)     檢測(cè)范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA895Hu    人胰島素受體(ISR)檢測(cè)試劑盒    ELISA Kit for Insulin ReHZptor (ISR)     檢測(cè)范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA839Hu    人促甲狀腺素釋放激素(TRH)檢測(cè)試劑盒    ELISA Kit for Thyrotropin Releasing Hormone (TRH)     檢測(cè)范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA837Hu    人誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(NOS2)檢測(cè)試劑盒    ELISA Kit for Nitric Oxide Synthase 2, Inducible (NOS2)     檢測(cè)范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA838Hu    人抑制素βA(INHβA)檢測(cè)試劑盒    ELISA Kit for Inhibin Beta A (INHbA)     檢測(cè)范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA855Hu    人核因子κB受體激活因子配基(RANκL)檢測(cè)試劑盒    ELISA Kit for ReHZptor Activator Of Nuclear Factor Kappa B Ligand (RANkL)     檢測(cè)范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA372Hu    人凝溶膠蛋白(GS)檢測(cè)試劑盒    ELISA Kit for Gelsolin (GS)     檢測(cè)范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA878Hu    人血管生成素樣蛋白1(ANGPTL1)檢測(cè)試劑盒    ELISA Kit for Angiopoietin Like Protein 1 (ANGPTL1)     檢測(cè)范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA860Hu    人上皮中性粒細(xì)胞激活肽78(ENA78)檢測(cè)試劑盒    ELISA Kit for Epithelial Neutrophil Activating Peptide 78 (ENA78)     檢測(cè)范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA371Hu    人10kDa干擾素γ誘導(dǎo)蛋白(IP10)檢測(cè)試劑盒    ELISA Kit for Interferon Gamma InduHZd Protein 10kDa (IP10)     檢測(cè)范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA373Hu    人結(jié)蛋白(Des)檢測(cè)試劑盒    ELISA Kit for Desmin (Des)     檢測(cè)范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA376Hu    人輔肌動(dòng)蛋白α2(ACTN2)檢測(cè)試劑盒    ELISA Kit for Actinin Alpha 2 (ACTN2)     檢測(cè)范圍：9.375-1000pg/ml    
xyB895Hu    人甘露聚糖結(jié)合凝集素關(guān)聯(lián)*蛋白酶1(MASP1)檢測(cè)試劑盒    ELISA Kit for Mannose Associated Serine Protease 1 (MASP1)     檢測(cè)范圍：9.375-1000pg/ml    
xyB538Hu    人細(xì)胞胱硫醚γ裂解酶(CSE)檢測(cè)試劑盒    ELISA Kit for Cystathionine Gamma Lyase (CSE)     檢測(cè)范圍：9.375-1000pg/ml    
xyB899Hu    人前胰淀粉樣蛋白(ProIAPP)檢測(cè)試劑盒    ELISA Kit for Proislet Amyloid Polypeptide (ProIAPP)     檢測(cè)范圍：9.375-1000pg/ml    
xyB901Hu    人激活素受體樣激酶1(ALK1)檢測(cè)試劑盒    ELISA Kit for Activin ReHZptor Like Kinase 1 (ALK1)     檢測(cè)范圍：9.375-1000pg/ml    
xyB902Hu    人心肌鈣黏蛋白(CDHH)檢測(cè)試劑盒    ELISA Kit for Cadherin, Heart (CDHH)     檢測(cè)范圍：9.375-1000pg/ml    
xyB903Hu    人纖維膠凝蛋白3(FCN3)檢測(cè)試劑盒    ELISA Kit for Ficolin 3 (FCN3)     檢測(cè)范圍：9.375-1000pg/ml    
xyB904Hu    人血小板膜糖蛋白Ⅵ(GP6)檢測(cè)試劑盒    ELISA Kit for Glycoprotein VI, Plaet (GP6)     檢測(cè)范圍：9.375-1000pg/ml    
xyB907Hu    人纖維膠凝蛋白2(FCN2)檢測(cè)試劑盒    ELISA Kit for Ficolin 2 (FCN2)     檢測(cè)范圍：9.375-1000pg/ml