細(xì)胞:AVV-293細(xì)胞
中文名稱:人胚腎細(xì)胞
生長特性:貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基:DMEM-H +10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請嚴(yán)格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS 緩沖液潤洗細(xì)胞兩次,加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時間,通??刂圃?1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰_酶,加 6~8ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,盡量把細(xì)胞層吹落,吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項操作或凍存。
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寄生蟲在其生命周期中常常經(jīng)歷顯著的外形變化,
在短膜蟲期(epimastigote)階段,動基體在核之前,而且只有鞭mao的一部分與細(xì)胞相連。布氏錐蟲的近親有許多不同的形狀,這表明這些寄生蟲在進(jìn)化中也改變了它們的形態(tài)。
當(dāng)減少了布氏錐蟲錐鞭mao體的一種稱為ClpGM6的蛋白質(zhì)表達(dá)的時候,這個細(xì)胞切換到了一種類似于短膜蟲期的形態(tài)。動基體接近核或者在其之前,而且鞭mao的一長部分伸出了細(xì)胞。這些寄生蟲與短膜蟲期不一樣——它們?nèi)狈σ娪谶@個生命階段的一種獨(dú)_特的表面蛋白——但是它們有能力存活并且繁殖超過40代。
ClpGM6位于鞭mao的附著區(qū),而且很可能有助于把鞭毛與細(xì)胞體連接。失去ClpGM6導(dǎo)致鞭mao的幫助確定細(xì)胞尺寸和形狀的附著區(qū)縮短。
讓它們能夠適應(yīng)不同的生活環(huán)境并且繁盛起來。研究發(fā)現(xiàn),這些變形看上去可能沒有看上去的那么困難。非洲的“昏睡病”是一種由稱為布氏錐蟲(Trypanosoma brucei)的由蠅傳播的寄生蟲物種導(dǎo)致的疾病。
這種單細(xì)胞寄生蟲擁有一個內(nèi)部儲藏著這個細(xì)胞的線粒體DNA的動基體以及對于細(xì)胞運(yùn)動具有關(guān)鍵作用的一個伸出的鞭mao。布氏錐蟲在其發(fā)育周期經(jīng)歷了外形和構(gòu)成的重大變化。
在一個稱為錐鞭mao體(trypomastigote)的階段,動基體位于核之后,而幾乎鞭mao的所有部分都與細(xì)胞相連。
研究提出,在生命周期中以及在寄生蟲進(jìn)化中出現(xiàn)的顯著形態(tài)變化可能是由于幾個關(guān)鍵蛋白質(zhì)層次上的調(diào)整造成的,而不是源于寄生蟲蛋白質(zhì)或DNA內(nèi)容的大量變化。