豬elisa試劑盒操作中的注意事項說明：

　　1、使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。

　　2、根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔。

　　3、加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。

　　4、甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

　　5、每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

　　6、甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

　　7、每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育5分鐘。避免光照。

　　8、取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結(jié)果。

　　9、在450nm波長處測定各孔的OD值。

　　對于含多個抗原決定簇的大分子蛋白，使用雙抗體夾心模式測定相當簡便，豬elisa試劑盒采用此種測定模式。具體測定方法如下：

　　1．首先以雙抗體之一于碳酸鹽緩沖液中4℃下放置一個晚上包被聚苯乙烯等固相，形成固相抗體，洗滌去除未與固相結(jié)合或結(jié)合不緊的抗體后，用小牛血清或牛血清白蛋白等封閉，洗滌去除未結(jié)合的部分及雜質(zhì)。

　　2．加入含待測物的臨床樣本如血清等，溫育一定時間后洗板；此時，待測抗原就會與固相上特異抗體反應而吸附于固相上。

　　3．加入酶標記的雙抗體之二，溫育一定時間后洗板；此時，在固相上即形成雙抗體與特異抗原的夾心產(chǎn)物。

　　4．加入酶底物，溫育顯色測定。