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上海莼試生物技術(shù)有限公司
主營產(chǎn)品： ELISA試劑盒,ELISA試劑盒價格，ELISA試劑盒報(bào)價 |
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| 參考價 | 面議 |
- 型號 50T
- 品牌 其他品牌
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 所在地 上海市
更新時間：2021-07-16 10:19:03瀏覽次數(shù)：203
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實(shí)時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：火雞源性成分 (Turkey)PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號：CP100000
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品分類：熒光-PCR法
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
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二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記6個離心管，分別為6，5，4，3，2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭，從6號管中取5 μL溶液到5號管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭，從5號管中取5 μL溶液到4號管中，重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進(jìn)行定量PCR（見下步），每個樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
雞葡萄球菌色素B抗體Human FAM158A ELISA Kit兔子免疫球蛋白M(IgM)免疫試劑盒
猴頭菌（猴頭蘑、猬菌）色素c氧化酶1抗體Human FAM160B2 ELISA Kit兔子免疫球蛋白G(IgG)免疫試劑盒
黑曲霉表面趨化因子受體4相關(guān)蛋白4抗體Human FAM160B1 ELISA Kit兔子免疫球蛋白E(IgE)免疫試劑盒
節(jié)桿菌屬表面趨化因子受體4相關(guān)蛋白6抗體Human FAM164C ELISA Kit兔子免疫球蛋白A(IgA)免疫試劑盒
蘇云金芽孢桿菌表面趨化因子受體4相關(guān)蛋白8抗體Human FAM116B ELISA Kit兔子硫氧化還原蛋白(Trx)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌抗體Human FAM114A1 ELISA Kit兔子(CS)免疫試劑盒
球孢白僵菌上皮類癌相關(guān)抗原抗體Human FAM117B ELISA Kit兔子硫酸類肝素(HS)免疫試劑盒
馬鏈球菌馬亞種磷酸化蛋白磷酸激酶PKC/CPI-17抗體Human FAM168B ELISA Kit兔子硫酸角質(zhì)素(KS)免疫試劑盒
柱狀田頭菇（茶樹菇、楊樹菇）著絲粒蛋白KHuman FAM118B ELISA Kit兔子可溶性粘附分子(Sam)免疫試劑盒
Geobacter腫瘤/抗原1BHuman FAM119A ELISA Kit兔子可溶性血管粘附分子1(sVCAM-1)免疫試劑盒
蘇云金芽孢桿菌轉(zhuǎn)鐵蛋白受體抗體Human FANCM ELISA Kit兔子可溶性血管內(nèi)皮蛋白C受體(sEPCR)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌8號染色體開放閱讀框K29抗體Human FAM76A ELISA Kit兔子可溶性P選擇素(sP-selectin)免疫試劑盒
大腸埃希菌色素P450 3A4抗體Human FARS2 ELISA Kit兔子可溶性E選擇素(sE-selectin)免疫試劑盒
*百脈根根瘤菌色素CYP2D1抗體Human FARSA ELISA Kit兔子可溶性CD40配體(sCD40L)免疫試劑盒
鴨肝炎病CD33抗體Human FAM84B ELISA Kit兔子抗中性粒顆?？贵w(ANGA)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌視網(wǎng)膜母瘤結(jié)合蛋白8抗體Human FAM78A ELISA Kit兔子抗Ⅲ抗體(AT-Ⅲ Ab)免疫試劑盒
火雞源性成分 (Turkey)PCR檢測試劑盒: 唐菖蒲伯克霍爾德氏菌 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品氨基肽酶3試劑盒8-姜酚;8-Gingerol
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR鏈激酶試劑盒6-姜酚;6-Gingerol
楊鏈格孢Alternaria│populi 質(zhì)量規(guī)格：>98%,標(biāo)準(zhǔn)品連蛋白試劑盒2-金剛烷;2-Adamantanol
淡紫擬青霉Paecilomyces│lilacinus (Thom) Samson 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR粒特異性抗核抗體試劑盒金剛烷;Adamantane
南極棲海面菌Aequorivita│antarctica 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥99%,標(biāo)準(zhǔn)品粒趨化蛋白-2試劑盒京尼平苷酸;Geniposidic ac
青霉屬Penicillium│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR粒巨噬集落激因子抗體試劑盒金石蠶苷;Poliumoside
