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實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：BAR基因PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號：CP100202
產(chǎn)品規(guī)格：48T  0.1PCR管/48T   0.2PCR管
產(chǎn)品分類：PCR-熒光探針法
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
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二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6，5，4，3，2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭，從6號管中取5 μL溶液到5號管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭，從5號管中取5 μL溶液到4號管中，重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進(jìn)行定量PCR（見下步），每個(gè)樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個(gè)陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
地衣芽孢桿菌20號染色體開放閱讀框141抗體Human ANGPTL2(Angiopoietin-related protein 2) ELISA Kit人胱抑素F(CST7)免疫試劑盒

馬闊里類芽孢桿菌20號染色體開放閱讀框160抗體Human OGDH(2-oxoglutaRate dehydrogenase, mitochondrial) ELISA Kit人胱抑素B(CSTB/CST6/STFB)免疫試劑盒

扣囊復(fù)膜孢酵母親環(huán)蛋白（親環(huán)素）40抗體Human CCR4(C-C chemokine receptor type 4) ELISA Kit人胱抑素A(CSTA/STF1/STFA)免疫試劑盒

Bacillus aryabhattai T調(diào)控相關(guān)蛋白抗體Human IKBKB(Inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase subunit beta) ELISA Kit人胱天蛋白酶激活的脫氧核糖核酸酶(CAD)免疫試劑盒

熱吸水鏈霉菌突觸后蛋白CRIPT抗體Human ROMO1(Reactive oxygen species modulator 1) ELISA Kit人胱天蛋白酶9(Casp-9)免疫試劑盒

米曲霉鈣粘附蛋白8抗體Human THRA(Thyroid hormone receptor alpha) ELISA Kit人胱天蛋白酶8(Casp-8)免疫試劑盒

Bacillus tequilensis6號染色體開放閱讀框174抗體Human FH(FumaRate hydRatase, mitochondrial) ELISA Kit人胱天蛋白酶-5(CASP5)免疫試劑盒

科氏葡萄球菌科氏亞種6號染色體開放閱讀框150抗體Human GAPDH(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase) ELISA Kit人胱天蛋白酶3(Casp-3)免疫試劑盒

水生哈薩克斯坦酵母X染色體開放閱讀框56抗體Human MASP1(Mannan-binding lectin serine protease 1) ELISA Kit人胱天蛋白酶12(Casp-12)免疫試劑盒

美味肝菌9號染色體開放閱讀框152抗體Human LSS(Lanosterol synthase) ELISA Kit人胱天蛋白酶10(CASP10)免疫試劑盒

大腸埃希氏菌6號染色體開放閱讀框58抗體Human IDE(Insulin-degrading enzyme) ELISA Kit人胱天蛋白酶1(Casp-1)免疫試劑盒

爪哇根霉接觸蛋白相關(guān)蛋白4抗體Human IFI16(Gamma-interferon-inducible protein 16) ELISA Kit人胱硫β-合酶(CBS)免疫試劑盒

鏈格孢CD24抗體Human KLK7(Kallikrein-7) ELISA Kit人胍基丁脲水解酶/凝集酶(AGMAT)免疫試劑盒

枯草芽胞桿菌接觸蛋白相關(guān)蛋白3抗體Human FPR2(N-formyl peptide receptor 2) ELISA Kit人瓜氨酸免疫試劑盒

囊毛霉CD24抗體Human ACAN(Aggrecan core protein) ELISA Kit人骨織素(Ostn)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌限局性核因子3抗體Human 12-HETE(12-Hydroxyeicosatetraenoic Acid) ELISA Kit人骨形成蛋白6(BMP-6)免疫試劑盒
BAR基因PCR檢測試劑盒: 羊布氏菌 質(zhì)量規(guī)格：>98%，BRγ分泌酶elisa試劑盒2-O-alpha-L-鼠李吡喃糖甙鳶尾

產(chǎn)氨短桿菌Brevibacterium│ammoniagenes 質(zhì)量規(guī)格：BRγ氨基丁酸試劑盒尚含雞納甙

蘇云金芽孢桿菌Bacillus│thuringiensis 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRβ-轉(zhuǎn)導(dǎo)素重復(fù)序列包含蛋白試劑盒雙酮草酸鹽

優(yōu)雅食烷菌Alcanivorax│venustensis 質(zhì)量規(guī)格：BRβ抑制蛋白2試劑盒水甘草堿

擬諾卡氏菌屬菌種Nocardiopsis│sp. 質(zhì)量規(guī)格：商品級β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白試劑盒沙蟾精

釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格：>97%,BRβ素試劑盒三十烷

同溫層芽孢桿菌Bacillus│stratosphericus 質(zhì)量規(guī)格：>99%，BRβ位淀粉樣前體蛋白裂解酶2試劑盒蘇Ⅳ

淺白隱球酵母Cryptococcus│albidus 質(zhì)量規(guī)格：>99%，BRβ位淀粉樣前體蛋白裂解酶1試劑盒紅Ⅲ