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實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對(duì)定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：立克次體PCR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào)：CP99461
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品分類：熒光PCR法
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
?
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照，只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6，5，4，3，2和1號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號(hào)管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。
5. 換槍頭，從6號(hào)管中取5 μL溶液到5號(hào)管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。
6. 換槍頭，從5號(hào)管中取5 μL溶液到4號(hào)管中，重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
7. NC管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
8. 從1-6號(hào)管中分別取5 μL和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量PCR（見(jiàn)下步），每個(gè)樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
-6''-O-木糖苷英文名稱： Basic Fuchsin促卵泡激素抗體規(guī)格：1g

芹菜糖苷英文名稱： Bromothymol blue神經(jīng)元核抗原抗體規(guī)格：5g

蛤蚧（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Bismuthiol IIFAM135B蛋白抗體規(guī)格：1g

隔山消（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Beryllon II促卵泡激素受體抗體規(guī)格：25g

根皮苷（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Bromopyrogallol red成纖維生長(zhǎng)因子12抗體規(guī)格：5g

根皮素(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Basic Fuchsin成纖維生長(zhǎng)因子14抗體規(guī)格：100ml

功勞木（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Brilliant Yellow腦型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體規(guī)格：25ml

鉤藤(鉤藤)（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Congo redFAM96B蛋白抗體規(guī)格：5ml

鉤藤堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Calconcarboxylic acid腦胚胎鋅指樣蛋白1抗體規(guī)格：1g

鉤吻素（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Calconcarboxylic acidFAM29蛋白抗體規(guī)格：25g

鉤吻素子（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Chlorophenol redMaFF相關(guān)蛋白抗體規(guī)格：5g

狗脊（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Calmagite7抗體規(guī)格：100g

枸杞子（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： CadionFEM1B抗體規(guī)格：25g

枸櫞酸血根堿英文名稱： Cupferron纖維母生長(zhǎng)因子3抗體規(guī)格：5g
立克次體PCR檢測(cè)試劑盒甲酯鹽酸鹽Glycineester

鈉(>98%,BR)Glycinesalt

乙酯鹽酸鹽Glycineester

甘氨脫氧膽酸(GDCA)glycodeoxycholicacid質(zhì)量規(guī)格：>97%,一水物

甘氨脫氧膽酸鈉(進(jìn)分)Sodium16409-34-0

甘氨酰-L-；甘洛二肽Glycyl-L-tyrosine質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR,水合物

甘氨酰胺鹽酸鹽Glycinamide1668-10-6

甘丙肽(1-13)-神經(jīng)肽Y(25-36)酰胺(M32)GalaninY(25-36),

甘丙肽，大鼠Galanin,114547-31-8

甘丙肽，豬Galanin,88813-36-9

甘丙肽信號(hào)關(guān)聯(lián)肽（1-41）酰胺；Preprogalanin(65-105)酰胺GalaninAssociated

甘草查而酮A(標(biāo)準(zhǔn)品)A

甘草次酸(α型),18alpha-甘草次酸(標(biāo)準(zhǔn)品)Glycyrrhetinic1449-05-4

甘草次酸(β型),18beta-甘草次酸(標(biāo)準(zhǔn)品)18-beta-glycyrrheticacid質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

甘草次酸(β型),18beta-甘草次酸18-beta-glycyrrheticacid質(zhì)量規(guī)格：>98%