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參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：tE9基因PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號：CP100216
產(chǎn)品規(guī)格：48T  0.1PCR管/48T   0.2PCR管
產(chǎn)品分類：PCR-熒光探針法
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
?
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
毛簇木霉2號染色體開放閱讀框18抗體Human SLC50A1(Sugar transporter SWEET1) ELISA Kit人電子轉(zhuǎn)運(yùn)黃素蛋白-泛醌氧化還原酶/電子轉(zhuǎn)運(yùn)黃素蛋白脫氫酶(ETFDH)免疫試劑盒

植物乳桿菌植物亞種色素c氧化酶6抗體Human SNAP25(Synaptosomal-associated protein 25) ELISA Kit人電子轉(zhuǎn)移黃素蛋白β肽(ETFB)免疫試劑盒

首爾鏈霉菌嗜酸粒趨化蛋白24抗體Human DDR2(Discoidin domain-containing receptor 2) ELISA Kit人電壓門控通道抗體(VGKC-ab)免疫試劑盒

束紅球菌巨噬炎性蛋白15Human NFE2L1(Nuclear factor erythroid 2-related factor 1) ELISA Kit人電壓門控通道(VGKC)免疫試劑盒

美澳型核果褐腐病菌巨噬炎性蛋白抗體Human PTGES(Prostaglandin E synthase) ELISA Kit人第八因子相關(guān)抗原(FⅧAg)免疫試劑盒

黃色籃狀菌CD72蛋白抗體Human CHAD(Chondroadherin) ELISA Kit人第10號染色體缺失并與張力蛋白同源的磷酸酶(PTEN/MMAC1)免疫試劑盒

粗毛假蜜環(huán)菌中心體蛋白128抗體Human SNAP25(Synaptosomal-associated protein 25) ELISA Kit人抵抗素樣分子β(RELM-β)免疫試劑盒

釀酒酵母著絲粒蛋白O抗體Human SLC50A1(Sugar transporter SWEET1) ELISA Kit人抵抗素(Resistin)免疫試劑盒

阿達(dá)青霉3號染色體開放閱讀框17抗體Human TTPAL(Alpha-tocopherol transfer protein-like) ELISA Kit人低氧誘導(dǎo)因子3α(HIF-3α)免疫試劑盒

煙曲霉質(zhì)膜微囊蛋白-2抗體Human HSPE1(10 kDa heat shock protein, mitochondrial) ELISA Kit人低氧誘導(dǎo)因子2(HIF-2)免疫試劑盒

成晶節(jié)桿菌磷酸化質(zhì)膜微囊蛋白-2抗體Human LIG3(DNA ligase 3) ELISA Kit人低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)免疫試劑盒

隆德假單胞菌3號染色體開放閱讀框24抗體Human C1S(Complement C1s subcomponent) ELISA Kit人低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白5(LRP-5)免疫試劑盒

噬果膠黃桿菌補(bǔ)體C3b抗體Human PGLYRP2(N-acetylmuramoyl-L-alanine amidase) ELISA Kit人低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白4(LRP-4)抗體(IgG)免疫試劑盒

大腸埃希氏菌補(bǔ)體C3b-α鏈抗體Human COLEC11(Collectin-11) ELISA Kit人低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白4(LRP-4)免疫試劑盒

鴨疫里默氏桿菌CD3抗體Human CD109(CD109 antigen) ELISA Kit人低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1(LRP-1)免疫試劑盒

天麻萌發(fā)菌8103號*著絲粒蛋白C1抗體Human CNTN1(Contactin-1) ELISA Kit人低密度脂蛋白免疫復(fù)合物(LDL-IC)免疫試劑盒
tE9基因PCR檢測試劑盒: 蘇云金芽胞桿菌東北亞種 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRRho關(guān)聯(lián)含卷曲螺旋蛋白激酶2試劑盒硫秋水仙苷

釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格：>96.5%,BRRho GDP解離抑制因子1試劑盒輪環(huán)藤寧

Clostridium  cellulosiClostridium  cellulosi 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRREST協(xié)阻抑因子3試劑盒龍膽山酮酚

堅(jiān)強(qiáng)芽胞桿菌Bacillus│firmus 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRras同源物基因家族成員b試劑盒氯內(nèi)酯

百日咳博德特氏菌Bordetella│pertussis 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRQ熱科克斯體2試劑盒藜蘆酸

鏈球菌屬Streptococcus│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BPQ熱科克斯體2試劑盒龍血素C

曲霉屬Aspergillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRQ熱科克斯體1試劑盒龍血素A
使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6，5，4，3，2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭，從6號管中取5 μL溶液到5號管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭，從5號管中取5 μL溶液到4號管中，重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進(jìn)行定量PCR（見下步），每個(gè)樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個(gè)陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。