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實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類(lèi)和非探針類(lèi)兩類(lèi)，探針類(lèi)是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類(lèi)是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對(duì)定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱(chēng)：五種致瀉性大腸埃希氏菌鑒定試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào)：CP100317
產(chǎn)品規(guī)格：96T
產(chǎn)品分類(lèi)：PCR法
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
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二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱(chēng)和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照，只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6，5，4，3，2和1號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號(hào)管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。
5. 換槍頭，從6號(hào)管中取5 μL溶液到5號(hào)管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。
6. 換槍頭，從5號(hào)管中取5 μL溶液到4號(hào)管中，重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
7. NC管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
8. 從1-6號(hào)管中分別取5 μL和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量PCR（見(jiàn)下步），每個(gè)樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
艾登短芽孢桿菌半乳糖神經(jīng)酰酶抗體Human XPA ELISA Kit雞白介素8(IL-8)免疫試劑盒

節(jié)桿菌磷酸化葡萄糖合成酶1抗體Human YEATS2 ELISA Kit雞白介素6受體(IL-6R)免疫試劑盒

雷州灣芽孢桿菌半乳糖凝集素3抗體Human XPNPEP1 ELISA Kit雞白介素6(IL-6)免疫試劑盒

亮白曲霉生長(zhǎng)因子受體結(jié)合蛋白7抗體Human YOD1 ELISA Kit雞白介素4(IL-4)免疫試劑盒

鞘氨單胞菌屬糖基轉(zhuǎn)移酶1結(jié)構(gòu)域1抗體Human YES1 ELISA Kit雞白介素3(IL-3)免疫試劑盒

變異居白蟻菌G蛋白偶聯(lián)受體LGR7蛋白抗體Human XRCC5/Ku80(X-ray repair cross-complementing protein 5) ELISA Kit雞白介素2(IL-2)免疫試劑盒

干酪乳桿菌G蛋白偶聯(lián)受體MRGX2蛋白抗體Human XRCC4 ELISA Kit雞白介素1β(IL-1β)免疫試劑盒

少根根霉東京變種G蛋白偶聯(lián)受體RDC1蛋白抗體Human XRCC2 ELISA Kit雞白介素18(IL-18)免疫試劑盒

類(lèi)阿達(dá)青霉G蛋白偶聯(lián)受體TAS1R1蛋白抗體Human PDE1C(Calcium/calmodulin-dependent 3′,5′-cyclic nucleotide phosphodiesterase 1C) ELISA Kit雞白介素17(IL-17)免疫試劑盒

膠孢G蛋白偶聯(lián)受體TGR7蛋白抗體Human XIAP(X-linked inhibitor of apoptosis ) ELISA Kit雞白介素15(IL-15)免疫試劑盒

田菁根瘤菌G蛋白偶聯(lián)受體GPR157蛋白抗體Human XRN1 ELISA Kit雞白介素12(IL-12/70)免疫試劑盒

橙黃色擲孢酵母G蛋白偶聯(lián)受體GPR176蛋白抗體Human XRN2 ELISA Kit雞白介素10(IL-10)免疫試劑盒

嗜糖黃桿菌G蛋白偶聯(lián)受體GPR10蛋白抗體Human MTF1(Metal regulatory transcription factor 1) ELISA Kit雞白介素1(IL-1)免疫試劑盒

皺褶假絲酵母G蛋白偶聯(lián)受體C5L2蛋白抗體Human XIRP2 ELISA Kit雞γ干擾素(IFN-γ)免疫試劑盒

托魯斯山鏈霉菌G蛋白偶聯(lián)受體EX33蛋白抗體Human XYLT1 ELISA Kit雞β內(nèi)酰酶(β-lactamase)免疫試劑盒

鏈卵菌屬G蛋白偶聯(lián)受體GPR102蛋白抗體Human YME1L1 ELISA Kit雞β干擾素(IFN-β/IFNB)免疫試劑盒
五種致瀉性大腸埃希氏菌鑒定試劑盒: 枯草芽孢桿菌 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品草質(zhì)素

史氏芽孢桿菌Bacillus│smithii 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98.0%(HPLC)百蕊草素I

鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.8%（GC)硫酸金雀花堿