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上海莼試生物技術有限公司
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參考價 | ¥1-¥5800 | /件 |
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經(jīng)銷商 -
所在地
上海市
更新時間:2024-09-29 17:22:26瀏覽次數(shù):77
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原代細胞培養(yǎng)的具體步驟:
1、準備:取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面,紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。
2、布局:點燃酒精燈,安裝吸管帽。
3、處理組織:把組織塊置于燒杯中,用Hanks液漂洗2-3次,去除血污;如懷疑組織可能污染,可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。
5、消化:或用恒溫水浴,或置于37℃溫箱消化均可,消化中每隔20分鐘應搖動一次,如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。
6、分離:在消化過程中見消化液發(fā)混濁時,可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察,如組織已分散成細胞團或單個細胞,立即終止消化,隨即通過適宜不銹鋼篩,濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速(500-1000轉/分)離心消化液5分鐘,吸出上清,加入適量含有血清的培養(yǎng)液。
7、計數(shù):用計數(shù)板計數(shù),如細胞懸液細胞密度過大,再補加培養(yǎng)液調(diào)整后,分裝入培養(yǎng)瓶中。對大多數(shù)細胞來說,pH要求在7.2-7.4范圍,培養(yǎng)液呈微紅色,如顏色偏黃,說明液體變酸,可用NaHCO3調(diào)整。
8、培養(yǎng):置于37℃溫箱培養(yǎng),如用CO2溫箱培養(yǎng),瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞,紗布塞易生霉菌,每次換液時需要換新塞。
商品屬性:
組織來源 | 睪丸 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
產(chǎn)品貨號 | CS-X3529 | 生長特性 | 貼壁 |
細胞簡介:
大鼠精原分離自睪丸組織;睪丸呈微扁的卵圓形,表面光滑,覆蓋著鞘膜臟層;深部是質地堅韌的白膜,在睪丸后緣增厚并進入睪丸,形成睪丸縱膈,縱膈發(fā)出許多睪丸小隔深入睪丸實質,將實質分為睪丸小葉,數(shù)量約為100~200。每個小葉內(nèi)約有2~4條生精小管,具有產(chǎn)生的作用;生精小管之間的結締組織中有睪丸間質細胞,具有產(chǎn)生雄激素的作用。生精小管首先匯合成為精直小管(也稱直精小管),精直小管進入睪丸縱膈形成睪丸網(wǎng),之后睪丸網(wǎng)發(fā)出12~15條輸出小管通過睪丸后上緣進入附睪。生精小管的生精上皮是產(chǎn)生的地方,由生精細胞和支持細胞構成,成人的生精小管有30~70cm長。的產(chǎn)生過程包括生精細胞的分化、支持細胞的作用、雄激素的調(diào)節(jié)等。生精細胞并不是一種細胞,它是多種細胞的統(tǒng)稱,包括精原細胞、初級精母細胞、次級精母細胞、細胞、。前者依次發(fā)育分化為后者,且依次從生精上皮的基部到管腔面排列,最終形成進入到管腔之中,并借助生精上皮外側的肌樣細胞的收縮作用向下一級管腔移動。精原細胞是指由睪丸管上皮的原始生殖細胞經(jīng)過多次有絲分裂而形成的細胞。原始的胚細胞經(jīng)分化形成精原細胞,精原細胞經(jīng)復制形成初級精母細胞,初級精母細胞經(jīng)過減數(shù)第一次分裂后形成次級精母細胞,再經(jīng)過減數(shù)第二次分裂形成精細胞。精細胞經(jīng)過變形最終形成。精原細胞屬于雄性生殖細胞的早期發(fā)育階段,能不斷地進行有絲分裂,增加細胞數(shù)量,并分化為精母細胞。精原細胞貼近基膜,細胞呈圓形,核大而圓,梁色深。精原細胞在男性的一生中具有幾乎無限分裂的能力,而且分裂過程中能夠保持原有的基因性狀不變。在增殖過程中,通過精原細胞的分裂和分化,由精原細胞產(chǎn)生精母細胞,進入成熟分裂,因而通過增殖可大大增加精母細胞的數(shù)量。按理論推算,一個精原細胞通過數(shù)次細胞分裂,可形成上百個初級精母細胞。但在生精過程早期,生精細胞很易發(fā)生變性,故實際上少于這個數(shù)字。在精原細胞的增殖過程中,有一部分Ad型精原細胞不再繼續(xù)分裂,而是保留下來,成為新的精原干細胞,因此通過增殖不僅能使精原干細胞不斷得到更新,且能使精原干細胞保持一定數(shù)量,從而使的產(chǎn)生持續(xù)地進行下去,不會枯竭。
方法簡介:
實驗室分離的大鼠精原經(jīng)AP(堿性磷酸酶)免疫組化染色鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
質量檢測:
實驗室分離的大鼠精原采用混合酶多步消化法制備而來,細胞總量約為5×105cells/瓶。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑、GDNF、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態(tài):圓形、橢圓形
傳代特性:可傳2-3代左右
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
原代細胞VS細胞系:
用酶或機械方法直接從人或動物組織中分離出來的細胞。嚴格來說,從機體分離出來到傳代之前的細胞稱為原代細胞,絕大部分的原代細胞在體外可以分裂10-15次(這與細胞的端粒長短有關),再加上取材,成本等因素,通常會把培養(yǎng)的第一代到第十代以內(nèi)的細胞統(tǒng)稱為原代細胞。
原代細胞一般傳至10代左右,大部分細胞衰老死亡,但是有極少數(shù)的細胞能夠度過“危機"而繼續(xù)傳下去,存活的細胞一般能夠傳到40-50代,叫細胞株。當50代以后又會出現(xiàn)“危機",這時有部分細胞的遺傳物質發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c,從而可能無限制地傳代下去,稱為細胞系。
也有認為細胞系指原代細胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細胞群體。也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細胞。由此便引申出了后來的有限細胞系、無限細胞系,因此,細胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細胞,廣義是指可傳代的細胞。而細胞株是通過選擇法或克隆形成法,從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物的單一細胞稱為細胞株。
細胞系具有容易培養(yǎng)、種類多、價格便宜、無限傳代等優(yōu)點,也非常容易在培養(yǎng)、凍存中發(fā)生錯誤鑒定及交叉污染的問題。
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FGF6 Protein Human 重組人 FGF6 / FGF-6 蛋白
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