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小鼠腫瘤壞死因子 α(TNF-α)ELISA 檢測試劑盒 產品說明書

2024-6-17  閱讀(328)

小鼠腫瘤壞死因子 α(TNF-α)ELISA 檢測試劑盒

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檢測原理

試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被小鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。 


樣品收集、處理及保存方法 

1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心 10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心 30 分鐘取上清。 

3. 細胞上清液:3000 轉離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心 10 分鐘取上清。 

5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 


自備物品

1. 酶標儀(450nm)。

2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL。

3. 37℃恒溫箱。


操作注意事項 

1. 試劑盒保存在 2-8℃,使用前室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正?,F象,水浴加熱使結晶溶解后再使用。

2. 實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

3. 預處理后的樣本無需稀釋,直接取 10μL 加樣即可。

4. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

5. 所有液體組分使用前充分搖勻。


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