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使用說明：
轉(zhuǎn)膜前的準(zhǔn)備：5-6張裁好的濾紙；裁好的轉(zhuǎn)印膜；足夠的1×超快轉(zhuǎn)移buffer
一、濕轉(zhuǎn)法（Tank blot）
1、配制1×超快轉(zhuǎn)膜液。
1升1×Western超快轉(zhuǎn)膜液：取50ml 20×超快轉(zhuǎn)膜液，加入750ml雙蒸水，混勻之后加入200ml甲醇，混勻即可?，F(xiàn)配現(xiàn)用，配好后置于冰上存放。
2、將濾紙和海綿浸泡在1×超快轉(zhuǎn)膜液中，*浸濕。
3、將凝膠在超純水中浸泡漂洗2分鐘，去除膠表面的SDS；隨后將凝膠浸泡在1×超快
轉(zhuǎn)膜液中。
注意：在使用6%或8%分離膠轉(zhuǎn)移大分子蛋白時，應(yīng)該降低甲醇含量至10%，以獲得更好轉(zhuǎn)移效果。
4、按照以下順序做好轉(zhuǎn)印三明治結(jié)構(gòu)。
二、半干轉(zhuǎn)（Semi-dry blot）
| 1×超快轉(zhuǎn)膜液配制量
| ||
| 100ml | 500ml | 1000ml |
20×超快轉(zhuǎn)膜液 | 5ml | 25ml | 50ml |
甲醇 | 20ml | 100ml | 200ml |
超純水 | 75ml | 375ml | 750ml |
2、將濾紙浸泡在1×超快轉(zhuǎn)膜液中，*浸濕。
3、將凝膠在超純水中浸泡漂洗2分鐘，去除膠表面的SDS；隨后將凝膠浸泡在1×超快
轉(zhuǎn)膜液中。
注意：水中漂洗時間一定不能超過2分鐘，否則分子量較大的蛋白不能*轉(zhuǎn)移
三、轉(zhuǎn)移條件
1、濕轉(zhuǎn)
推薦使用恒流轉(zhuǎn)移，電流可設(shè)置350-400mA，轉(zhuǎn)膜液中離子成分較多，可以承受大電流，并且發(fā)熱量較低。
分離膠濃度 | 建議轉(zhuǎn)膜時間 | 推薦蛋白轉(zhuǎn)移范圍 |
6% | 100-120min | 100-300KD |
8% | 90-100min | 40-300KD |
10% | 30-40min | 25-90kD |
12% | 30-40min | 10-60KD |
15% | 30-40min | 10-40kD |
注：不推薦使用恒壓轉(zhuǎn)移，因轉(zhuǎn)膜液中離子成分較多，當(dāng)電壓在100v左右時，電流會達到400mA，此時已達到普通電泳儀器zui大電流，隨著時間延長，可能無法達到穩(wěn)定的100v電壓。
2、半干轉(zhuǎn)
電流 | 轉(zhuǎn)膜時間 |
300mA | 30 to 35 min |
330mA | 25 to 30 min |
350mA | 25 to 30 min |
375mA | 20 to 25 min |
400mA | 15 to 20 min |
