LAMP Green™ *50X DMSO 溶液* 等溫?cái)U(kuò)增方法以流線型、指數(shù)方式提供核酸靶序列的檢測(cè)?，F(xiàn)有成功檢測(cè) LAMP 反應(yīng)的染料大多基于使用比色分析的終點(diǎn)法。 LAMP Green™ *50X DMSO 溶液* 可以對(duì) LAMP 反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光測(cè)量。可以使用普通實(shí)時(shí) PCR 儀器上的 SYBR 或 FAM 通道檢測(cè)染料。 LAMP Green 與瓊脂糖凝膠電泳兼容，可以在凝膠上運(yùn)行并通過(guò)凝膠成像儀進(jìn)行分析。

樣品實(shí)驗(yàn)方案

表 1. 25 μL LAMP 反應(yīng)混合物

以下方案可用作指導(dǎo)，應(yīng)根據(jù)您的實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行優(yōu)化

1.在室溫下解凍所有要使用的組件并放在冰上。 短暫渦旋混合并離心以收集材料。

2.如表 1 所述制備反應(yīng)混合物。列出了 25 μL/LAMP 反應(yīng)的體積。 根據(jù)使用情況相應(yīng)調(diào)整體積。 如有必要，可以優(yōu)化 LAMP Green 濃度。

3.渦旋反應(yīng)混合物和離心機(jī)收集材料。

4.密封反應(yīng)容器。

5.在 65°C 下孵育 30 分鐘。 如有必要，可以延長(zhǎng)時(shí)間（即，對(duì)于低拷貝目標(biāo)、具有挑戰(zhàn)性的樣品類型或已知會(huì)產(chǎn)生較慢擴(kuò)增時(shí)間的反應(yīng)）

6.如果使用 qPCR儀，可以使用 SYBR 或 FAM 濾波片實(shí)時(shí)讀取信號(hào)。 對(duì)于基于酶標(biāo)儀的檢測(cè)，在 Ex/Em = 490/525 nm（Cutoff = 515 nm）處測(cè)量信號(hào)

7.如果在 LAMP 反應(yīng)完成后分析反應(yīng)產(chǎn)物，則通過(guò)在 >80°C 下加熱 5 分鐘使酶失活。

注意：LAMP Green 與瓊脂糖凝膠電泳兼容，因此可以在瓊脂糖凝膠上分析樣品。