多重 PCR 通過在同一個(gè)反應(yīng)中同時(shí)完成多個(gè)基因的擴(kuò)增成為臨床與基礎(chǔ)研究領(lǐng)域中一種簡便快捷的篩選檢測方法。已有大量文獻(xiàn)詳細(xì)的討論了通常影響 PCR 反應(yīng)質(zhì)量的條件，而在多重 PCR 中常見的困難和重要的實(shí)驗(yàn)因素卻鮮見報(bào)道。本文使用多對引物對多重 PCR 的各種條件進(jìn)行了研究。研究表明，對于成功進(jìn)行多重 PCR 尤為重要的因素是：用于擴(kuò)增不同基因的不同引物對之間的相對濃度、 PCR 緩沖液的濃度、循環(huán)溫度、氯化鎂和 dNTP 濃度間的平衡。在實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，本文給出了一個(gè)多重 PCR 的標(biāo)準(zhǔn)方法，并給出常見問題的解決辦法。

介紹：

多重 PCR 就是在同一個(gè)反應(yīng)管中同時(shí)完成多個(gè)不同基因擴(kuò)增的 PCR 反應(yīng)。這一方法zui早報(bào)道于 1988 年 （ 6 ） ，已被成功的用于缺失分析 （ 2,8 ） ，突變 （ 14 ） 與多態(tài)性 （ 11 ） ，以及定量分析 （ 10 ） 與反轉(zhuǎn)錄 PCR （ 7 ） 等多個(gè) DNA 檢測領(lǐng)域。

PCR 反應(yīng)中各種試劑的作用已被討論過 （ 3,9,12,13 ） ，也已有許多研究團(tuán)體對多重 PCR 的方法進(jìn)行了描述。但是很少有人對影響多重 PCR 結(jié)果的因素（如引物濃度、循環(huán)條件等）進(jìn)行過深入的討論 （ 5,15 ） 。本實(shí)驗(yàn)使用常規(guī)含 KCl 的 PCR 緩沖液對 50 種基因的各種組合進(jìn)行了多重 PCR 反應(yīng)，針對伴隨多重 PCR 的一些問題，如均一性差、某些基因難以擴(kuò)出、重復(fù)性差等問題，對影響擴(kuò)增的相關(guān)參數(shù)進(jìn)行了研究。基于實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)我們設(shè)計(jì)了多重 PCR 的標(biāo)準(zhǔn)方法 (Figure 1) ，并提供了對可能碰到的許多問題的解決方案，這對于臨床與基礎(chǔ)研究領(lǐng)域中使用 PCR 技術(shù)的工作者都會有所幫助。

材料與方法：

PCR使用的標(biāo)準(zhǔn)溶液和試劑

100 mM 母液的核苷酸 (dNTP) ( 購于 Pharmacia Biotech dCTP (Amersham, Arlington Heights, IL,USA) 。使用 100μL 、 25μL 、 6.2μL 反應(yīng)體積得到的結(jié)果相同，對于小的反應(yīng)體積，加樣（尤其是 dNTP ）至關(guān)重要。實(shí)驗(yàn)中使用了各種 PCR 儀，經(jīng)過細(xì)微調(diào)節(jié)后都得到了好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。